Эсийн нийт РНХ тусгаарлах иж бүрдэл Эсээс нийт РНХ тусгаарлах цэвэршүүлэх иж бүрдэл
Багцын тодорхойлолт:
Төрөл бүрийн өсгөвөрлөсөн эсээс 11 минутын дотор өндөр цэвэршүүлсэн, өндөр чанартай нийт РНХ авах боломжтой.
RNase-гүй
Өрөөний температурт ажилладаг (15-25 ℃)
ДНХ цэвэрлэх баганатай
РНХ-ийн өндөр гарц
Хурдан: 11 минутын дотор олборлолтыг дуусгана
Аюулгүй байдал: Органик химийн бодис байхгүй
Тодорхойлолт
Энэхүү иж бүрдэл нь 96, 24, 12, 6 цооногийн хавтанд өсгөвөрлөсөн эсүүдээс өндөр цэвэршилттэй, өндөр чанартай нийт РНХ-ийг үр дүнтэй гаргаж авах боломжтой Foregene-ийн боловсруулсан ээрэх багана болон томъёог ашигладаг.
Энэхүү иж бүрдэл нь ДНХ цэвэрлэх үр дүнтэй баганаар хангадаг бөгөөд энэ нь дээд давхаргыг болон эсийн лизатыг хялбархан салгаж, геномын ДНХ-г холбож, устгадаг.Үйл ажиллагаа нь энгийн бөгөөд цаг хугацаа хэмнэдэг.
TЗөвхөн РНХ багана нь РНХ-г өвөрмөц томъёогоор үр дүнтэй холбож чаддаг.Олон тооны дээжийг нэгэн зэрэг боловсруулж болно.
Иж бүрдэл хэсгүүд
| Багцын найрлага | RE-03111 | RE-03114 |
| 50 Т | 200 Т | |
| Буфер cRL1* | 25 мл | 100 мл |
| Буфер cRL2 | 15 мл | 60 мл |
| RW1 буфер* | 25 мл | 100 мл |
| RW2 буфер | 24 мл | 96 мл |
| RNase-гүй ddH2O | 10 мл | 40 мл |
| Зөвхөн РНХ багана | 50 | 200 |
| ДНХ цэвэрлэх багана | 50 | 200 |
| Заавар | 1 | 1 |
*Buffer cRL1 болон Buffer RW1 нь цочроох эмх замбараагүй давс агуулсан тул үйл ажиллагааны явцад бээлий өмсөж, хамгаалалтын арга хэмжээ авна уу.
Онцлог, давуу тал
■ Бүх процессыг тасалгааны температурт (15-25 ℃), мөс банн, бага температурт центрифуггүйгээр гүйцэтгэдэг.
■ Бүхэл бүтэн иж бүрдэл нь RNase-гүй, РНХ-ийн задралын талаар санаа зовох шаардлагагүй.
■ ДНХ цэвэрлэх багана нь ДНХ-г тусгайлан холбодог бөгөөд ингэснээр нэмэлт DNase нэмэхгүйгээр иж бүрдэл нь геномын ДНХ-ийн бохирдлыг арилгах боломжтой.
■ Өндөр РНХ-ийн гарц: Зөвхөн РНХ багана ба өвөрмөц томъёо нь РНХ-г үр дүнтэй цэвэршүүлдэг.
■ Хурдан хурд: ажиллахад хялбар, 11 минутын дотор дуусгах боломжтой.
■ Аюулгүй байдал: Органик урвалж шаардлагагүй.
■ Өндөр чанар: Цэвэршүүлсэн РНХ нь өндөр цэвэршилттэй, уураг болон бусад хольцгүй, дараа дараагийн янз бүрийн туршилтуудыг хангаж чадна.
Иж бүрдэл програм
Энэ нь 96, 24, 12, 6 цооногийн ялтсуудад өсгөвөрлөсөн эсээс нийт РНХ-г гаргаж авах, цэвэршүүлэхэд тохиромжтой.
Ажлын урсгал
Диаграм
Эсийн нийт РНХ тусгаарлах иж бүрдэлийн агароз гель батерейны диаграмм нь дээрх өөр өөр тооны эсийг эмчилсэн бөгөөд 20μl эзэлхүүнтэй уусмал, 2μl цэвэршүүлсэн нийт РНХ 1% авна.
Хадгалалт ба хадгалах хугацаа
Өрөөний температурт (15-25 ℃) 12 сар, 2-8 хэмд илүү удаан (24 сар) хадгалах боломжтой.
CRL1 буферийг 2-гидрокси-1-этантиол (заавал биш) нэмсний дараа 1 сарын турш 4 хэмд хадгалж болно.
РНХ ялгагдаагүй эсвэл РНХ-ийн гарц бага байна
Эдийн дээжийн РНХ-ийн агууламж, үйл ажиллагааны арга, шингэний хэмжээ гэх мэт нөхөн сэргээх үр ашигт нөлөөлдөг олон янзын хүчин зүйлүүд байдаг.
1. Ашиглалтын явцад мөсөн банн эсвэл криоген (4 ° C) центрифуг хийсэн.
Зөвлөмж: Өрөөний температурт (15-25 ° C) бүх процессын турш ажиллуулж, мөстэй усанд хийж, бага температурт центрифуг хийж болохгүй.
2. Дээжийг буруу хадгалсан эсвэл дээж хадгалах хугацаа хэтэрсэн.
Зөвлөмж: Дээжийг -80 °C температурт хадгалах эсвэл шингэн азотонд хөлдөөж, хөлдөөх гэсэлтийн үед давтан хэрэглэхээс зайлсхийх;РНХ олборлоход шинэ эд эс эсвэл өсгөвөрлөсөн эсийг ашиглахыг хичээ.
3. Дээжний задрал хангалтгүй.
Зөвлөмж: Эдийг нэгэн төрлийн болгохдоо эдийг хангалттай нэгэн төрлийн болгож, РНХ ялгарахыг тайлбарлахын тулд эд эсүүд хангалттай хуваагдсан эсэхийг шалгаарай.
4. Угаагч бодисыг зөв нэмээгүй.
Зөвлөмж: RNase-Free ddH гэдгийг баталгаажуулна уу2Цэвэршүүлэх баганын мембраны дунд хэсэгт O дуслаар нэмнэ.
5. Үнэмлэхүй этанолын зөв хэмжээг Buffer RL2 эсвэл Buffer RW2-д нэмээгүй.
Зөвлөмж: Зааврыг дагаж, RL2 Buffer болон Buffer RW2-д үнэмлэхүй этилийн спиртийн зөв хэмжээг нэмж, иж бүрдлийг хэрэглэхийн өмнө сайтар холино.
6. Эд эсийн дээжийн тун нь тохиромжгүй.
Зөвлөмж: 10-20 мг эд эс буюу (1-5) × 10 хэрэглэнэ6500 мкл тутамд эсүүд RL1 буфер, учир нь эдийг хэт их хэрэглэх нь РНХ-ийн олборлолтыг бууруулахад хүргэдэг.
7. Элюцийн хэмжээ зохисгүй буюу бүрэн бус шүүрэл.
Зөвлөмж: Цэвэршүүлэх баганын уусмалын хэмжээ 50-200 мкл;Хэрэв шүүрлийн нөлөө хангалтгүй бол урьдчилан халаасан RNase-Free ddH нэмсний дараа өрөөний температурт байрлуулах хугацааг сунгахыг зөвлөж байна.2O, жишээ нь 5-10 минутын турш.
8. Цэвэршүүлэх баганад Buffer RW2 угаасны дараа этанолын үлдэгдэл байна.
Зөвлөмж: Хэрэв RW2 буферийг угаасны дараа этилийн спиртийн үлдэгдэл байвал 1 минутын турш хоосон хоолойгоор центрифуг хийх бол хоосон хоолойг центрифуг хийх хугацааг 2 минут хүртэл нэмэгдүүлэх эсвэл үлдэгдэл этилийн спиртийг зохих ёсоор зайлуулахын тулд цэвэршүүлэх баганыг тасалгааны температурт 5 минутын турш байрлуулж болно.
Цэвэршүүлсэн РНХ нь доройтдог
Цэвэршүүлсэн РНХ-ийн чанар нь дээжийг хадгалах, RNase-ийн бохирдол, манипуляци гэх мэт хүчин зүйлүүдтэй холбоотой байдаг.
1. Эд эсийн дээжийг хугацаанд нь хадгалдаггүй.
Зөвлөмж: Хэрэв эд эсийн дээж, эсийг цуглуулсны дараа цаг тухайд нь ашиглахгүй бол -80 ° C эсвэл шингэн азотыг нэн даруй крио хадгалах хэрэгтэй.РНХ гаргаж авахын тулд боломжтой бол шинээр авсан эд эс эсвэл эсийн дээжийг ашиглана.
2. Эдийн дээжийг олон удаа хөлдөөх гэсгээх.
Зөвлөмж: Эдийн дээжийг хадгалахдаа хадгалахын тулд жижиг хэсгүүдэд хувааж, дээжийг дахин дахин хөлдөөх, РНХ задрахаас зайлсхийхийн тулд нэг хэсгийг нь авах нь зүйтэй.
3. Үйл ажиллагааны явцад RNase-ийг нэвтрүүлсэн эсвэл нэг удаагийн бээлий, маск зэргийг өмсдөггүй.
Зөвлөмж: РНХ-г задлах туршилтыг РНХ боловсруулах тусдаа өрөөнд хамгийн сайн хийх бөгөөд туршилтын өмнө хүснэгтийг цэвэрлэнэ.
Туршилтын явцад RNase-ийг нэвтрүүлснээс үүдэлтэй РНХ-ийн задралыг багасгахын тулд нэг удаагийн бээлий, маск өмс.
4. Ашиглалтын явцад урвалжууд RNase-ээр бохирдсон байна.
Зөвлөмж: Холбогдох туршилтуудад зориулж шинэ амьтны нийт РНХ тусгаарлах иж бүрдэлээр солино уу.
5. РНХ боловсруулахад ашигладаг центрифугийн хоолой, үзүүр зэрэг нь RNase-ээр бохирдсон байна.
Зөвлөмж: РНХ задлахад ашигласан центрифугийн хоолой, үзүүр, пипетк зэрэг нь бүгд RNase агуулаагүй гэдгийг баталгаажуулна уу.
Цэвэршүүлсэн олж авсан РНХ нь доод туршилтуудад нөлөөлдөг
Цэвэршүүлэх баганаар цэвэршүүлсэн РНХ нь давсны ион, уургийн агууламж хэт их байвал урвуу транскрипц, Northern Blot et al.
1. Элюцлэгдсэн РНХ нь давсны ионы үлдэгдэлтэй.
Зөвлөмж: RW2 буферт этилийн спиртийн хэмжээг зөв нэмсэн эсэхийг баталгаажуулж, ажиллахад заасан төвөөс зугтах хурдаар 2 удаа цэвэршүүлэх баганыг угаах;хэрэв давсны ионы үлдэгдэл байгаа бол цэвэршүүлэх баганыг RW2 буферт тасалгааны температурт 5 минут байлгаад давсны бохирдлыг арилгахын тулд центрифуг хийнэ.
2. Элюцлэгдсэн РНХ-д этилийн спиртийн үлдэгдэл.
Зөвлөмж: RW2 буферийг угаасны дараа хоосон хоолойг центрифуг хийх ажиллагааг зааж өгсөн центрифугийн хурдаар хийж, этанолын үлдэгдэл хэвээр байвал хоосон хоолойг центрифуг хийх хугацааг 2 минут хүртэл нэмэгдүүлэх эсвэл тасалгааны температурт 5 м байлгана.
