Оршил:

РНХ, шинжлэх ухааны нэр нь рибонуклеины хүчил, товчлол нь RiboNucleic Acid-аас гаралтай бөгөөд фосфодиэстерийн холбоогоор дамжуулан дор хаяж хэдэн арван рибонуклеотидыг холбосноор үүсдэг нуклейн хүчлийн нэг төрөл юм.

РНХ-г судлах үндсэн зорилго нь бохирдолгүй нийт РНХ-г гаргаж авах явдал бөгөөд РНХ-г задлах үндсэн зарчмыг ойролцоогоор дараах байдлаар нэгтгэн дүгнэж болно.

1. Эхлээд эсийг тасалдуулж өгнө

2. Дараа нь макромолекулын хольцыг (уураг, липид, ДНХ гэх мэт) зайлуулна.

3. Эцэст нь давс, органик уусгагчийг зайлуулж, РНХ-ийг цаашид цэвэршүүлэх явцад РНХ тунадасждаг.

Олборлох аргын өнгөрсөн ба одоо

РНХ олборлох эхний үеийн арга бол Пиотр Чомчински хэмээх өвөө, эмээ Николетта Сакчи нарын зохион бүтээсэн TRIzol тунадасны арга (гуанидин изотиоцианат, фенол, хлороформ гэх мэтийг ашигладаг урвалжууд) юм, учир нь энэхүү шинэ бүтээл нь РНХ-ийг хурдан бөгөөд хялбар аргаар гаргаж авах боломжийг олгодог бөгөөд тэр цагаас хойш RNA-ийн судалгааг эхлүүлсэн.

Дараа нь өвөө энэ патентыг Invitrogen-д зарж, Invitrogen энэ аргыг дэлхийд сурталчилж, өргөн хэрэглэгддэг арга болжээ.

Хожим нь Invitrogen-ийг Thermo худалдаж авсан!

Төлөөлөгч бүтээгдэхүүн: Invitrogen-ийн TRIzol урвалж

Гэсэн хэдий ч TRIzol хур тунадасжуулах арга нь олон удаа тунадасжуулах, РНХ-ийн хандыг шаарддаг бөгөөд ашигласан урвалжууд нь хортой бөгөөд ажиллахад удаан хугацаа шаардагддаг.

Иймээс бусад хольцыг зайлуулахын зэрэгцээ дээжинд РНХ-ийн нөхөн сэргэлтийг нэмэгдүүлэхийн тулд тусгай нуклейн хүчлийг шингээх материал болгон цахиурын гель мембраныг ашигласан хоёр дахь үеийн багана-фермент цэвэрлэх арга бий болсон.

Хоёр дахь үеийн арга нь тогтвортой гүйцэтгэлийн үндсэн дээр үйл ажиллагааг хялбарчилж, эрсдэлт хүчин зүйлийг бууруулж, РНХ-ийн олборлолтын үр ашгийг сайжруулдаг.

Төлөөлөгч бүтээгдэхүүн: QIAGEN RNeasy ба дотоодын ихэнх бүтээгдэхүүн

Гэсэн хэдий ч эхний болон хоёр дахь үеийн аргуудын аль алинд нь ДНХ-ийн бохирдлыг арилгахын тулд DNase ашиглах шаардлагатай байдаг бөгөөд энэ нь дараагийн туршилтуудад хүндрэл учруулдаг.Үлдэгдэл DNase нь урвуу транскрипцийн үр ашгийг бууруулж, эхний хэлхээний cDNA синтезийг бууруулж, үр дүнгийн нарийвчлалд нөлөөлнө.

Тиймээс гурав дахь үеийн олборлолтын аргыг хоёр дахь үеийн үндсэн дээр оновчтой болгодог.Туршилтанд ямар нэгэн фермент нэмэх шаардлагагүй бөгөөд РНХ-ийг зөвхөн хоёр баганатай хялбархан олж авах боломжтой.

1-р багана: ДНХ цэвэрлэх багана

2-р багана: Зөвхөн РНХ багана нь РНХ-г тусгайлан шингээж, сэргээдэг

Ийм энгийн ажиллагаа нь цаг хугацаа хэмнээд зогсохгүй доод талын туршилтуудын ажиллагааг хөнгөвчлөх болно!

Төлөөлөгч бүтээгдэхүүн: QIAGEN RNeasy Plus болонГадаадРНХ цэвэршүүлэх цуврал бүтээгдэхүүн

（RNeasy Plus）

（Foregene-ийнУргамлын нийт РНХ тусгаарлах хэрэгсэл）

Чимээгүй хэлье!Foregene-ийн РНХ-ийн иж бүрдэл нь хэрэглэхэд маш хялбар RNase Eraser-ийг танилцуулж байна. Энэ нь хүний ​​биед ямар нэгэн хорт бодис оруулахгүйгээр хатуу гадаргуу дээрх 400мкг RNase-ийг 1 минутын дотор бүрэн арилгах боломжтой!

Зураг1: Үйл ажиллагааны процессын харьцуулсан график

Foregene-ийн бүтээгдэхүүнүүд нь РНХ-ийн олборлолтыг хоёрхон дуугаар дуусгах боломжтой тул туршилтын явцдаа бусдад атаархах хэрэггүй!

Зураг2:Eтуршилтын үр дүн харьцуулах диаграм

Эхний үе (1: TRIzol)

Хоёр дахь үе (2: QIAGEN-ийн RNeasy)

Гурав дахь үе (3: QIAGEN-ийн RNeasy plus, 4: Foregene)

Зураг3: qPCR график (олшруулах муруй график)

Эхний үе (ногоон нь TRIzol -, улаан нь TRIzol + гэсэн үг)

Хоёр дахь үе (тэнгэрийн хөх нь QIAGEN RNeasy-, улаан нь QIAGEN RNeasy + гэсэн үг)

Гурав дахь үе (цэнхэр нь QIAGEN RNeasy plus, ногоон нь Foregene гэсэн үг)

(Тэмдэглэл: qPCR графикийн “-” нь DNase нэмээгүй, ДНХ-ийн бохирдлыг арилгаагүй болохыг харуулж байна. Иймээс CT нь өндөр, үр дүн нь үнэн зөв биш байна; “+” нь DNase нэмж, ДНХ-ийн бохирдлыг арилгасан, үр дүн үнэн зөв байна)

Техникийн шинэчлэл бүр нь туршилтын ажиллагаа илүү энгийн бөгөөд хэрэглэгчдэд ээлтэй чиглэлд хөгжиж байна гэсэн үг юм.

Foregene нь илүү олон шинжлэх ухааны судлаачдад туршилтын цаг, зардлыг хэмнэж, өндөр чанартай туршилтын үр дүнг олж авах, шинжлэх ухааны судалгааны илүү үнэ цэнэтэй ололтуудыг хамтран бүтээхэд туслах зорилготой.