Зохиогчид: Ван Шиаоян, Жао Эрюү

Нэгж: Жяожөү эмнэлэг, Тунжи их сургуулийн харьяа Дунфан эмнэлэг

Одоогийн байдлаар амьсгалын замын эмгэг төрүүлэгч нуклейн хүчлийг илрүүлэх дээжийн гол төрөл бол хоолойн арчдас юм.Түгээмэл хэрэглэгддэг дээж хадгалах олон төрлийн шийдэл байдаг бөгөөд тэдгээрийг тээвэрлэх, хадгалахад хөргөгчинд эсвэл хөлдөөх шаардлагатай;Цуглуулах, тээвэрлэх явцад бага температурын бүх үйл явцыг хянах нь хэцүү бөгөөд дээжийг туршихаас өмнө чанарын хяналтыг хангахад хэцүү байдаг.^[1-2].

RNase (RNase) нь РНХ-г гидролиз болгодог эндонуклеаз бөгөөд голчлон нуклеотидын хоорондох фосфодиэстерийн холбоог тасалдаг.RNase молекул нь маш тогтвортой, бүтцэд нь дисульфидын холбоо байдаг, түүний үйл ажиллагаа нь хоёр валент катионууд байхыг шаарддаггүй тул RNase нь амархан денатуратгүй, өндөр температур эсвэл денатурант хэрэглэсний дараа ч нөхөн сэргээхэд хялбар байдаг.RNases нь эндоген ба экзоген гэж хуваагддаг.Эндоген RNases эсүүд хагарах үед нэгэн зэрэг ялгарч болно.Тиймээс эндоген RNases-ийн үүргийг арилгах нь РНХ олборлох үйл явцад маш чухал алхам юм.Экзоген РНазууд өргөн тархсан байдаг.РНХ нь агаар, хүний ​​арьс, үс, шүлсэнд байдаг бөгөөд эдгээр нь РНХ амархан задрах чухал шалтгаан болдог.^[3].

Өгөгдлийн асуулга

CANS-CL02-A009 "Молекулын оношилгооны салбарт эмнэлгийн лабораторийн чанар, чадамжийн итгэмжлэлийн удирдамжийг хэрэглэх нь" техникийн шаардлагад усны чанарын зохих стандартыг өргөдлийн дагуу томъёолохыг санал болгож байна;Нэг удаагийн агаар нэвтрэхгүй сав:

RNase/Ангилал

(1) RNase A

Үхрийн нойр булчирхайгаас гаралтай рибонуклеаза А (RNase A) нь РНХ дээрх пиримидиний үлдэгдлийн 3′ төгсгөлд тусгайлан дайрч, зэргэлдээх нуклеотидуудаас үүссэн цитозин эсвэл урацилыг таслах чадвартай эндорибонуклеаз юм.Фосфодиэфирийн холбоо, урвалын эцсийн бүтээгдэхүүн нь 3′ пиримидин нуклеотид ба төгсгөлд нь 3′ пиримидин нуклеотид бүхий олигонуклеотид юм.

(2) RNase T1

Рибонуклеаза T1 (RNase T1) нь Aspergillus orjzae-аас гаралтай бөгөөд энэ нь гуанины 3′-терминал фосфат дээр тусгайлан үйлчилдэг ба задрах газар нь гуанины 3′ фосфат ба зэргэлдээх нуклеотидын 5′ гидроксил хооронд байрладаг.Урвалын эцсийн бүтээгдэхүүн нь 3′гуанилийн хүчил ба төгсгөлд нь 3′гуанилийн хүчил агуулсан олигонуклеотидын хэсгүүд юм.

(3) RNase H

Ribonuclease H (RNase H) нь анх тугалын тимус эдээс нээсэн бөгөөд түүний кодлогч генийг Escherichia coli-д хувилсан.Энэ нь ДНХ-ийг тусгайлан доройтуулж чаддаг: РНХ-ийн эрлийз дуплекс дахь РНХ-ийн хэлхээ, үүний үр дүнд 3′-OH ба 5'-монофосфатын төгсгөлтэй олигонуклеотид ба мононуклеотидууд үүсдэг, энэ нь нэг эсвэл хоёр судалтай ДНХ эсвэл РНХ-ийг задлах боломжгүй.

RNase

Үйл ажиллагаа ба хэрэглээ

Рибонуклеаз нь рибонуклеины хүчлийн (РНХ) задралыг хурдасгаж, зохиомлоор нийлэгжүүлэх боломжтой.Эмийн тосыг гэмтэл, үе мөчний өвдөлтийг эмчлэхэд хэрэглэдэг.Мэдээллийн дагуу рибонуклеаз нь эзэн эсийн бодисын солилцоог өөрчилж, вирусын нийлэгжилтийг дарангуйлж, in vitro томуугийн вирүсийн тархалтыг саатуулж, тахианы үр хөврөлд вакцин, герпес вирус үүсэхийг саатуулдаг.Клиникийн хэрэглээнд рибонуклеазыг өдөр бүр 180 мг булчинд тарих нь тархалтын энцефалитын эмчилгээнд тустай, рибонуклеаз нь рибонуклеины хүчлийн (РНХ) задралыг хурдасгаж, одоо зохиомлоор нийлэгжүүлэх боломжтой.Эмийн тосыг гэмтэл, үе мөчний өвдөлтийг эмчлэхэд хэрэглэдэг.Мэдээллийн дагуу рибонуклеаз нь эзэн эсийн бодисын солилцоог өөрчилж, вирусын нийлэгжилтийг дарангуйлж, in vitro томуугийн вирүсийн тархалтыг саатуулж, тахианы үр хөврөлд вакцин, герпес вирус үүсэхийг саатуулдаг.Рибонуклеазыг эмнэлзүйн хэрэглээнд өдөрт 180 мг булчинд тарих нь эпидемийн энцефалитыг эмчлэхэд тустай.

RNase

Дарангуйлагчийн тодорхойлолт

RNase дарангуйлагч нэгжийн тодорхойлолт: 5ng RNase A-ийн идэвхжилийн 50%-ийг дарангуйлахад шаардагдах ферментийн хэмжээ нэг нэгж байна.

RNase дарангуйлагчид хэрхэн ажилладаг

Гуанидин изотиоцианат:

Гуанидин изотиоцианат нь C2H6N4S молекул томъёотой органик нэгдэл юм.Биологийн анагаах ухаан, химийн урвалж зэрэгт голчлон хэрэглэдэг.Гуанидин изотиоцианат нь уураг задалдаг бодис бөгөөд ихэвчлэн молекулын оношлогооны урвалжуудад задралын уусмалын гол бүрэлдэхүүн хэсэг болгон ашигладаг.Энэ нь эд эсийг задлах, эсийн бүтцийг устгах, нуклейн хүчлийг нуклеопротейнээс салгах чадвартай бөгөөд RNase-д хүчтэй денатурацитай байдаг.Энэ нь одоогоор хамгийн үр дүнтэй RNase дарангуйлагч юм.

TRIzol нь нийт РНХ-ийг эс, эд эсээс шууд гаргаж авах шинэлэг нийт РНХ ялгах урвалж юм.Энэ нь фенол, гуанидин изотиоцианат зэрэг бодисуудыг агуулдаг бөгөөд эсийг хурдан тасалдуулж, эсээс ялгардаг нуклеазыг саатуулдаг.

(Гэхдээ гуанидин изотиоцианат нь лабораторийн судлаачдын эрүүл мэндэд аюултай.)

RNasin:

Хархны элэг эсвэл хүний ​​бластодермээс гаргаж авсан хүчил гликопротейн.Rnasin нь RNase-ийн өрсөлдөх чадваргүй дарангуйлагч бөгөөд янз бүрийн RNase-тай холбогдож тэдгээрийг идэвхгүй болгодог.

(Дэлгэрэнгүй мэдээллийг: https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Hөндөр температур:

Өндөр температур нь уургийн денатурацийн нийтлэг хэрэгсэл юм.

Диэтилпирокарбонат (DEPC):

DEPC нь хүчтэй боловч бүрэн бус RNase дарангуйлагч бөгөөд RNase идэвхтэй бүлгийн амин хүчлийн имидазолын цагирагтай нийлж уургийг денатуратжуулах замаар RNase идэвхийг дарангуйлдаг.

Ванадил рибонуклеозидын цогцолбор:

RNase-тай шилжилтийн бодис хэлбэрээр холбогддог ванадийн ислийн ион ба нуклеозидуудаас бүрдсэн цогцолбор бөгөөд энэ нь RNase-ийн идэвхийг бараг бүрэн дарангуйлдаг.

бусад:

SDS, мочевин, диатомийн шороо гэх мэт нь RNase-д тодорхой дарангуйлах нөлөөтэй байдаг.

Шинжээчдийн тойм

Ли Юйжи ахлах техникч

Тунжи их сургуулийн харьяа Дунфан эмнэлгийн Жиаожоу эмнэлгийн лабораторийн хэлтсийн дарга

Экзоген RNase-ийн биологийн задралаас урьдчилан сэргийлэхийн тулд РНХ олборлох явцад маск, бээлий, малгай зэргийг байнга өмсөж, солих хэрэгтэй.Бүх шилэн савыг хатаах зууханд 200 градусын температурт 2 цагаас илүү хугацаагаар жигнэх ёстой.Хуванцар гэх мэт жигнэхэд ашигладаг материалыг DEPC усаар боловсруулж, дараа нь нэрмэл усаар угаана.РНХ-ийг олборлох, хадгалах, тодорхойлоход ашигладаг урвалжууд эсвэл төхөөрөмжүүд нь РНХ-д зориулагдсан байх ёстой бөгөөд РНХ-ийн бие даасан үйл ажиллагааны бүсийг бий болгох ёстой.

лавлагаа:

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J, et al.Австралийн уугуул хүүхдүүдийн амьсгалын доод замын цочмог халдвар эхлэхээс өмнөхөн хамар залгиурын нян ба вирусууд[J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2018,37 (9): 1785-1794.

[2] Хятадын Урьдчилан сэргийлэх Анагаах Ухааны Нийгэмлэгийн Эмнэлгийн халдварыг хянах салбар.Эмнэлзүйн бичил биетний сорьц цуглуулах, шалгах заавар [J].Хятадын эмнэлэгийн халдварын сэтгүүл, 2018(20):3192-3200.

[3] “Арван мянган клиник туршилт яагаад молекул биологийн шинжилгээний хэмжээ”