ПГУ-ын урвалжийн эхний үе шатанд праймер болон датчикийн гүйцэтгэлийг шалгах, хамгийн тохиромжтой урвалын нөхцлийг тодорхойлох нь албан ёсны туршилтыг жигд явуулах урьдчилсан нөхцөл юм.
Тэгэхээр бид праймер датчикийг эхний шатанд хэрхэн баталгаажуулах хэрэгтэй вэ?
Үндсэн үзүүлэлтүүд нь суурь, олшруулалтын муруй, ct утга, олшруулалтын үр ашиг, бага концентрацитай дээж илрүүлэх, CV гэх мэт.
Суурь
Суурь шугам нь ПГУ-ын олшруулах муруй дахь хэвтээ шугам юм.ПГУ-ын олшруулах урвалын эхний хэдэн мөчлөгт флюресценцийн дохио тийм ч их өөрчлөгддөггүй бөгөөд шулуун шугам үүсгэдэг.Энэ шулуун шугам нь суурь шугам юм.
ПГУ-ын праймер датчикийг скрининг хийхдээ суурь нь түвшин байгаа эсэхийг анхаарч үзээрэй.Праймер датчикийн концентрацийн цэвэр байдал нь суурь үзүүлэлтийг өсгөх эсвэл бууруулах зэрэг суурь үзүүлэлтэд нөлөөлнө.Суурь үзүүлэлт нь бас маш ойлгомжтой үзүүлэлт юм.
Олшруулах муруй
Өөр нэг зөн совингийн үзүүлэлт бол олшруулалтын муруй хэлбэр юм.Хоёрдогч олшруулалт болон бусад хэвийн бус олшруулалтын муруйгаас зайлсхийхийн тулд S хэлбэрийн муруйтай байх нь дээр.
Ct утга
Суурь шугамаас экспоненциал өсөлт хүртэлх гулзайлтын цэгт тохирох мөчлөгийн тоо нь Ct утга юм.
Ижил дээжийн хувьд өөр өөр праймер датчикууд нь өөр өөр олшруулалтын муруйг үүсгэдэг бөгөөд харгалзах Ct утга нь олшруулалтын үр ашиг ба хөндлөнгийн зэрэгт нөлөөлнө.Онолын хувьд бидний сонгосон праймер датчикийн Ct утга бага байх тусмаа сайн.
Олшруулах үр ашиг
ПГУ-ын олшруулалтын үр ашгийг үнэлэх хамгийн найдвартай бөгөөд тогтвортой аргуудын нэг бол судлаачдын өргөнөөр хүлээн зөвшөөрдөг стандарт муруй юм.Энэ арга нь зорилтот загваруудын харьцангуй тоог хянахын тулд хэд хэдэн дээж хийх явдал юм.Эдгээр дээжийг ихэвчлэн төвлөрсөн уусмалын цуваа шингэрүүлэлтээр хийдэг бөгөөд хамгийн түгээмэл хэрэглэгддэг нь 10 дахин шингэрүүлэлт юм.Цуврал шингэрүүлсэн дээжийг ашиглан, стандарт qPCR программыг ашиглан өсгөж Cq утгыг гаргаж, эцэст нь дээж бүрийн концентраци болон харгалзах Cq утгын дагуу стандарт муруй зурж Cq= -klgX0+b шугаман тэгшитгэл, олшруулалтын үр ашиг E=10(-1 /k)-1 гарна.qPCR-ийг тоон шинжилгээнд ашиглах үед олшруулалтын үр ашиг 90%-110% (3.6>k>3.1) байх шаардлагатай.
Бага концентрацитай дээж илрүүлэх
Дээжний концентраци бага байх үед янз бүрийн праймер датчикуудын илрүүлэх хурд өөр байна.Бид хуулбарлахын тулд бага концентрацитай 20 дээжийг сонгон авдаг бөгөөд хамгийн их илрүүлэх хурдтай праймер-зонд систем нь хамгийн шилдэг нь юм.
Өөрчлөлтийн коэффициент (CV)
Нуклейн хүчлийн олшруулалтыг илрүүлэх урвалжийн стандартын дагуу 10 давхар дээжийг өөр өөр праймер датчикаар илрүүлж болно.
Тоон урвалжууд:
Нарийвчлал
Нэг багц доторх нарийвчлал нь дараахь шаардлагыг хангасан байх ёстой: туршилтын концентрацийн логарифмын утгын хэлбэлзлийн коэффициент (CV,%) нь ≤5% байна.Дээжний концентраци бага байх үед илрүүлэх концентрацийн логарифмын хэлбэлзлийн коэффициент (CV,%) ≤10% байна.
Чанарын урвалжууд:
Нарийвчлал
Нэг багц дахь нарийвчлал нь дараахь шаардлагыг хангасан байх ёстой.
(1) Ct утгын хэлбэлзлийн коэффициент (CV,%) ≤5%
Ижил дээжийг 10 удаа зэрэгцүүлэн туршсан бөгөөд шинжилгээний үр дүн нь нийцэж байх ёстой
Шуудангийн цаг: 2021 оны 9-р сарын 18
