ПГУ-ын урвалыг хийхдээ хүн бүр ийм эсвэл ийм асуудалтай тулгарах болно гэдэгт би итгэдэг, гэхдээ тэдгээрийн ихэнхийг хоёр үндсэн асуудалд ангилж болно.

Генийн загварыг хэт бага өсгөх (олшруулах);
Зорилтот бус генийн олшруулалт хэт их байна.
Нэмэлтүүдийг ашиглах нь эдгээр асуудлыг шийдвэрлэх нийтлэг стратегиудын нэг юм.Ихэвчлэн нэмэлтүүдийн үүрэг нь хоёр талтай байдаг.
хоёрдогч бүтэцгенийн (хоёрдогч бүтэц);
Өвөрмөц бус праймерыг багасгах.
Өнөөдөр редактор танд ПГУ-ын урвалын нийтлэг нэмэлтүүд, тэдгээрийн үйл ажиллагааны талаар товч танилцуулах болно.
Хоёрдогч бүтцийг бууруулдаг нэмэлтүүд
сульфоксид(DMSO)
генийн дээжөндөр GC агуулгатай.Гэсэн хэдий ч DMSO нь Taq полимеразын идэвхийг ихээхэн бууруулдаг.Тиймээс хүн бүр загварын хүртээмж, полимеразын идэвхийг тэнцвэржүүлэх ёстой.Редактор нь танд тохирсон концентрацийг олохын тулд 2% -иас 10% хүртэл DSMO-ийн янз бүрийн концентрацийг туршиж үзэхийг зөвлөж байна.
Ион бус угаалгын нунтаг
0.1-1% Triton X-100, Tween 20 эсвэл NP-40 гэх мэт ион бус угаалгын нунтаг нь ихэвчлэн ДНХ-ийн хоёрдогч бүтцийг бууруулдаг.Хэдийгээр энэ нь загвар генийн олшруулалтыг нэмэгдүүлж болох ч өвөрмөц бус олшруулалтад хүндрэл учруулах болно.Тиймээс эдгээр нэмэлтүүд нь хог хаягдалгүй, бага өгөөжтэй ПГУ-ын урвалд сайн ажилладаг боловч харьцангуй цэвэр бус БНХАУ-ын урвалын хувьд тийм ч сайн биш юм.Ион бус угаалгын нунтагны өөр нэг давуу тал нь SDS-ийн бохирдлыг бууруулах явдал юм.Ихэвчлэн ДНХ-ийн олборлолтын явцад SDS-ийг ПГУ-ын шатанд оруулдаг бөгөөд энэ нь полимеразын идэвхийг ихээхэн саатуулдаг.Тиймээс урвалд 0.5% Tween-20 эсвэл Tween-40 нэмэх нь SDS-ийн сөрөг нөлөөг саармагжуулах боломжтой.
Бетайн_
Бетаин нь хоёрдогч бүтэц үүсэхийг бууруулснаар ДНХ-ийн олшруулалтыг сайжруулж чаддаг бөгөөд ерөнхийдөө арилжааны ПГУ-ын иж бүрдэлд "нууц" нэмэлт болдог.Хэрэв та бетаин хэрэглэхийг хүсвэл бетаин эсвэл бетаин моно-гидрат (Бетаин эсвэл бетаин моно-гидрат) тавих хэрэгтэй, харин бетаин гидрохлорид (Бетаин HCl) биш, эцсийн концентрацийг 1-1.7М хүртэл тохируулна.Бетайн нь мөн ДНХ хайлах/ДНХ-ийн денатурациас шалтгаалсан үндсэн хосын найрлагын хамаарлыг арилгадаг тул өвөрмөц байдлыг сайжруулахад тусалдаг.
Өвөрмөц бус праймерыг багасгах нэмэлтүүд
Формамид
Формамид бол түгээмэл хэрэглэгддэг органик ПГУ-ын нэмэлт юм.Энэ нь ДНХ-ийн гол ховил, жижиг ховилтой нэгдэж, улмаар мастер ДНХ-ийн давхар мушгианы тогтвортой байдлыг бууруулж, ДНХ-ийн хайлах температурыг бууруулдаг.ПГУ-ын туршилтанд ашигладаг формамидын концентраци ихэвчлэн 1-5% байдаг.
тетраметиламмонийн хлорид( TMAC)
Тетраметиламмонийн хлорид нь эрлийзжүүлэлтийн өвөрмөц чанарыг (эрлийзжих өвөрмөц чанар) нэмэгдүүлж, ДНХ-ийн хайлах температурыг нэмэгдүүлдэг.Тиймээс TMAC нь өвөрмөц бус праймерыг арилгаж, ДНХ болон РНХ-ийн буруу холболтыг багасгаж чадна.Хэрэв та ашигладаг болдоройтсон праймеруудПГУ-ын урвалд 15-100мМ концентрацид түгээмэл хэрэглэгддэг TMAC нэмэхээ санаарай.
Бусад нийтлэг нэмэлтүүд
Дээр дурдсан хоёр ангиллын нэмэлтүүдээс гадна ПГУ-ын урвалд олон нийтлэг нэмэлтүүд байдаг боловч тэдгээр нь өөр өөр үүрэгтэй боловч маш чухал юм.
Магнийн ион
Магнийн ион нь полимеразын зайлшгүй кофактор (кофактор) бөгөөд өөрөөр хэлбэл магнийн ионгүй бол полимераз идэвхгүй байдаг.Гэсэн хэдий ч хэт их магнийн ионууд нь полимеразын үр ашигт нөлөөлдөг.ПГУ-ын урвал бүрт магнийн ионы агууламж өөр өөр байх болно.Хелатын бодисууд (EDTA эсвэл цитрат гэх мэт), dNTPs ба уургийн концентраци нь магнийн ионуудын концентрацид нөлөөлдөг.Тиймээс, хэрэв танд ПГУ-ын туршилттай холбоотой асуудал гарвал та өөр өөр магнийн ионы концентрацийг, жишээлбэл, 1.0-аас 4.0 мм хүртэл хооронд нь 0.5-1 мм интервалтайгаар өөрчлөхийг оролдож болно.
Олон тооны хөлдөөх гэсэлтийн мөчлөг нь магнийн хлоридын уусмалын концентрацийн давхаргажилтад хүргэдэг гэдгийг тэмдэглэх нь зүйтэй.Тиймээс хэрэглэхийн өмнө бүрэн уусгаж, хэрэглэхийн өмнө сайтар холих хэрэгтэй.
Үхрийн сийвэнгийн альбумин(Үхрийн альбумин, BSA)
Молекулын химийн туршилтуудад үхрийн сийвэнгийн альбумин нь ялангуяа хязгаарлах ферментийн задрал, ПГУ-ын туршилтуудад маш түгээмэл нэмэлт бодис юм.ПГУ-ын урвалд BSA нь фенолын нэгдлүүд зэрэг бохирдуулагчийг багасгахад тустай.Мөн туршилтын хоолойн хананд урвалд орох бодисын наалдацыг бууруулж чадна гэж бас хэлдэг.ПГУ-ын урвалд ихэвчлэн BSA-ийн концентраци 0.8 мг / мл хүрч болно.
 
Холбоотой бүтээгдэхүүн:
ПГУ-ын баатар(будагтай)
ПГУ-ын баатар