Шууд ПГУ гэдэг нь нуклейн хүчлийг гаргалгүйгээр олшруулахын тулд амьтан, ургамлын эдийг шууд ашигладаг урвал юм.Олон талаараа шууд ПГУ нь ердийн ПГУ шиг ажилладаг

Гол ялгаа нь шууд ПГУ-д хэрэглэгддэг тусгай буфер бөгөөд дээжийг нуклейн хүчлийг олборлохгүйгээр шууд ПГУ-ын урвалд оруулах боломжтой боловч ПГУ-ын шууд урвалд оролцдог ферментийн хүлцэл, буферийн нийцтэй байдалд зохих шаардлага тавьдаг.

Нийтлэг дээжинд ПГУ-ын дарангуйлагч их эсвэл бага байдаг ч шууд ПГУ нь фермент ба буферийн нөлөөн дор найдвартай олшруулж чаддаг.Уламжлалт ПГУ-ын урвал нь загвар болгон өндөр чанарын нуклейн хүчил шаарддаг бөгөөд хэрэв загвар нь уураг болон бусад хольц агуулсан бол ПГУ-ын урвалын жигд явцыг саатуулдаг.Шууд ПГУ нь молекулын оношлогооны салбарт хамгийн алдартай технологи юм.

01 Шууд ПГУ-ыг анх амьтан, ургамалд ашиглаж байсан

Шууд ПГУ-ын хамгийн анхны хэрэглээ нь харх, муур, тахиа, туулай, хонь, үхэр гэх мэт цус, эд, үс, ургамлын навч, үр гэх мэт амьтан, ургамлын салбарт генотип, трансген, плазмид илрүүлэх, генийг задлах шинжилгээ, ДНХ-ийн эх үүсвэрийг тодорхойлох, төрөл зүйл тодорхойлох, SNP-ийн шинжилгээ болон бусад салбарт ашигладаг.

Эдгээр талбарууд нь нийтлэг шинж чанартай, өөрөөр хэлбэл зорилтот генийн агууламж харьцангуй өндөр, нуклейн хүчлийн олборлолт нь хүндрэлтэй байдаг тул шууд ПГУ нь цаг хугацаа хэмнэж, үр дүнд бага зэрэг нөлөө үзүүлэхээс гадна зардлыг хэмнэх боломжтой.

Эмгэг төрүүлэгчийг илрүүлэхэд ашигладаг шууд ПГУ нь сүүлийн жилүүдэд гарч байгаа асуудал бөгөөд зарим ПГУ-ын урвалж үйлдвэрлэгчид инноваци хийхдээ энэ чиглэлд ихээхэн хүчин чармайлт гаргасан.Ялангуяа COVID-19-ийн халдварт өвчний үед хүний ​​хамрын хүчиллэгийг чанарын өндөр түвшинд илрүүлэхэд бодит цагийн RT PCR технологи (rRT-PCR) ашигладаг Foregene компани судалж, боловсруулсан SARS-CoV-2 нуклейн хүчил илрүүлэх хэрэгсэл (Multiplex PCR Fluorescent Probe Method) зэрэг олон төрлийн илрүүлэгч бүтээгдэхүүнүүд зах зээл дээр гарч ирсэн. залгиурын арчдас дээж.

Foregene нь хэвийн ORF1ab, N, E, болон бусад илрүүлэх зорилгоор Шууд ПГУ-ын технологийг ашигладаг компаниудын нэг юм.хувилбар SARS-CoV-2 B.1.1.7 lineage (Их Британи), B.1.351 lineage (ZA), B.1.617 lineage (IND) болон P.1 lineage (BR) зэрэг хүний ​​хамар залгиур эсвэл ам залгиурын арчдас дахь нуклейн хүчлийн удам угсаа.

02  Шууд ПГУ-д шаардлагатай урвалжууд

Лизат дээж

Дээжийн лизатыг өөрөө тохируулах эсвэл худалдаж авах боломжтой.Өөр өөр брэндийн лизатуудын найрлага дахь ялгаа нь задрах чадварыг өөр өөр болгож, дараа нь задрах хугацаа нь арай өөр байх болно.Жишээлбэл, амьтны эд эсийн дээжийг бэлтгэхийн тулд ерөнхийдөө 30 минут эсвэл нэг шөнийн дотор лизис хийхийг зөвлөдөг бөгөөд вирусын задралын уусмал нь 3-10 минутын хооронд хэлбэлздэг.

ПГУ-ын мастер хольц

Тодорхой олшруулалтыг сайжруулж, олшруулах чадварыг нэмэгдүүлэхийн тулд халуун эхлэлийн ДНХ полимеразыг ашиглахыг зөвлөж байна.Шууд ПГУ-ын цөм нь өндөр тэсвэртэй полимераз юм.

ДНХ-ийн олшруулалтад нөлөөлдөг дээж дэх бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг арилгах эсвэл дарангуйлах

Дээжийг лизат, уураг, липид болон бусад эсийн үлдэгдэлтэй боловсруулсны дараа эдгээр бодисууд нь ПГУ-ын урвалыг дарангуйлдаг.Тиймээс шууд ПГУ-д эдгээр хүчин зүйлсийн нөлөөг багасгахын тулд зохих арилгах буюу дарангуйлагчийг нэмэх шаардлагатай.

03  Шууд ПГУ-ын мэдлэгийн таван цэгийн цуглуулга

Нэгдүгээрт, Шууд ПГУ-ын технологи нь янз бүрийн биологийн дээжийг шууд ПГУ-ын технологи юм.Энэхүү техникийн нөхцөлд нуклейн хүчлийг ялган гаргаж авах, эд эсийн дээжийг шууд объект болгон ашиглах, зорилтот генийн праймеруудыг нэмж ПГУ-ын урвал явуулах шаардлагагүй.

Хоёрдугаарт, Шууд ПГУ-ын технологи нь уламжлалт ДНХ-ийн загвар олшруулах технологи төдийгүй РНХ-ийн загвар урвуу транскрипцийн ПГУ-ыг агуулдаг.

Гуравдугаарт, Шууд ПГУ-ын технологи нь эдийн дээжинд ердийн чанарын ПГУ-ын урвалыг шууд гүйцэтгэхээс гадна бодит цагийн qPCR урвалыг багтаасан бөгөөд энэ нь урвалын системд флюресценцийн эсрэг хүчтэй интерференцийн чадвартай байх шаардлагатай бөгөөд эндоген флюресценц нь антагонист чадварыг унтраадаг.

Дөрөвдүгээрт, Шууд ПГУ-ын технологид чиглэсэн дээжүүд нь зөвхөн нуклейн хүчлийн загваруудыг гаргах шаардлагатай бөгөөд ПГУ-ын урвалд саад болох уураг, полисахарид, давсны ион гэх мэтийг зайлуулж болохгүй.Энэ нь урвалын систем дэх нуклейн хүчлийн полимераз ба ПГУ-ын холимогийг маш сайн эсэргүүцэл, дасан зохицох чадварыг шаарддаг бөгөөд нарийн төвөгтэй нөхцөлд ферментийн идэвхжил, хуулбарлах нарийвчлалыг баталгаажуулдаг.

Тавдугаарт, нуклейн хүчлээр баяжуулах эмчилгээгүйгээр шууд ПГУ-ын технологиор авсан эд эсийн дээж нь маш бага бөгөөд энэ нь урвалын системд маш өндөр мэдрэмжтэй, олшруулах үр ашигтай байхыг шаарддаг.