Hot-start Taq ферментийг өргөн хэрэглэдэг.Энгийн ДНХ полимеразтай харьцуулахад халуун эхлэлийн Taq фермент нь зарим өвөрмөц бус олшруулалт, праймер димер үүсэхээс үр дүнтэй зайлсхийж, зорилтот генийн олшруулалтын амжилтыг үр дүнтэй сайжруулж чадна.Ялангуяа генетикийн шинжилгээний салбарт халуун эхлэлийн Taq ферментийг үйлдвэрлэлд заавал хэрэглэх стандарт гэж тодорхойлсон бөгөөд энгийн ДНХ полимеразыг хэрэглэх ёсгүй.Дээр дурдсанаас харахад халуун эхлэлийн Taq ферментүүд өргөн хэрэглэгддэг.Одоогийн байдлаар дотоодын зах зээлд халуун эхлэлийн Taq ферментийн олон брэнд байдаг ч өндөр чанартай халуун эхлэлийн Taq ферментүүд тийм ч олон байдаггүй.Маш олон халуун эхлэлтэй Taq ферментийн бүтээгдэхүүнтэй тулгараад бид хэрхэн сонгох ёстой вэ?

1. Олшруулах өндөр үр ашигтай халуун эхлүүлэх Taq ферментийг сонго

ПГУ-ын олшруулалтын үр ашиг нь Taq ферментийн гүйцэтгэлтэй нягт холбоотой.Сайн Taq ферментийн урвалын системийг оновчтой болгосны дараа олшруулалтын үр ашиг 95% -иас дээш байх ба эхний загварт олшрох хүрээ өргөн байна.Зорилтот генийн агууламж бага үед хангалттай олшролт авч болно, загвар хэмжээ их байвал хордох нь тийм ч хялбар биш, экспоненциал олшруулалтын хугацаа урт.Гүйцэтгэл муутай Taq ферментийн хувьд урвалын системийг олон удаа оновчтой болгосон ч олшруулах үр ашиг нь 90% -иас бага, олшруулалтын муруйн "S" хэлбэр тодорхойгүй, налуу нь жижиг, муруй нь тэгш байна.Загварын хэмжээ бага байвал түүнийг өсгөх боломжгүй, загварын хэмжээ их байвал олшруулах нөлөө нь тийм ч тохиромжтой биш юм.Тиймээс олшруулах өндөр үр ашигтай ДНХ полимеразуудыг сонгох нь ПГУ болон qPCR-ийн амжилтанд маш чухал юм.

2. Хүчтэй ферментийн чадалтай халуун эхлүүлэх Taq ферментийг сонго

Taq ферментийн ферментийн хүч нь олшруулалтын үр ашигтай холбоотой.Ерөнхийдөө халуун эхлэлийн Taq ферментийн ферментийн хүч хүчтэй байх тусам ПГУ-ын олшруулалтын экспоненциал өсөлтийн хугацаа урт байх тусам ердийн "S хэлбэрийн" муруй байх тусам флюресценцийн дохионы утга өндөр байх ба мультиплекс ПГУ илрүүлэхэд илүү тохиромжтой байдаг.Сул ферментийн чадалтай брэндийн ДНХ полимеразууд нь ерөнхийдөө зөвхөн 2-plex урвалыг дэмждэг.3-plex урвалыг хийх үед олшруулах муруй бага, флюресценцийн дохионы утга бага, ердийн олшруулалтын муруй байхгүй тул үр дүнг дүгнэхэд хэцүү байдаг.

3. Өндөр мэдрэмжтэй халуун эхлүүлэх Taq ферментийг сонго

Ерөнхийдөө ДНХ полимераз нь олшруулах өндөр үр ашигтай, өндөр мэдрэмжтэй байдаг ч зөрчилдөөнтэй байдаг.Хэрэв олшруулах дээжийн зорилтот генийн элбэгшил бага байвал Taq ферментийн олшруулах мэдрэмжийг шалгахыг зөвлөж байна.Илрүүлэх хамгийн түгээмэл арга бол зорилтот генийн плазмидын фрагментийг 10 дахин эсвэл 5 дахин градиент шингэрүүлэх, доод шингэрүүлэлтээр ПГУ-ын илрүүлэлт хийх, илрүүлэх мэдрэмж өндөртэй халуун эхлэлийн Taq ферментийг сонгох явдал юм.

Судлаачид өөрсдийн туршилтын шаардлага, санхүүжилтийн нөхцлөөр сонголт хийх шаардлагатай байгааг дээрхээс харж болно.Халуун эхлэлийн Taq ферментийн олшруулагчийн үр ашиг, мэдрэмжийг илрүүлэхийн тулд градиент шингэрүүлэлтийн олшруулалтын туршилтыг хийх нь хамгийн сайн арга юм.

Foregene-ийн жишээ'Так ДНХ полимераз:

Foreasy HS Taq ДНХ Полимераз

Тодорхойлолт

Foreasy HS Taq ДНХ Полимераз нь генийн рекомбинацийн технологиор Escherichia coli инженерийн бактериудад илэрхийлэгддэг ДНХ полимераз юм.Ферментийг өвөрмөц урвалын буфертэй хослуулсан бөгөөд энэ нь бүтээгдэхүүнийг өндөр тэсвэртэй, нийцтэй болгодог бөгөөд дээжийн лизатыг (Foregene Lysis систем) шууд илрүүлэх урвалын загвар болгон ашиглах боломжтой.

Өргөдөл

Цэвэршүүлсэн загвар болон цэвэршүүлээгүй загваруудын чанарын ПГУ ба тоон ПГУ-ын илрүүлэлт.

Чанарын шалгалт

1. Экзоген нуклеазын идэвхжил илрээгүй

2. Хостгүй үлдэгдэл геномын ДНХ илрүүлэх ПГУ-ын арга

3. Хүний геном дахь нэг хуулбар генийг үр дүнтэй өсгөж чаддаг.

4. Долоо хоногийн турш тасалгааны температурт хадгална, идэвхгүй байдал өөрчлөгдөнө

Бүтээгдэхүүний дэлгэрэнгүй: https://www.foreivd.com/foreasy-hs-taq-dna-polymerase-product/