Тэргүүлэх

Урт кодчилдоггүй РНХ, lncRNA нь 200-аас дээш нуклеотидын урттай, ерөнхийдөө 200-100000 нт хооронд байдаг кодчилдоггүй РНХ юм.lncRNA нь эпигенетик, транскрипц, транскрипцийн дараах түвшинд генийн илэрхийлэлийг зохицуулж, X хромосомын чимээгүй байдал, геномын дардас ба хроматиныг өөрчлөх, транскрипцийг идэвхжүүлэх, транскрипцийн хөндлөнгийн оролцоо, цөмийн тээвэрлэлт, эсийн мөчлөгийн зохицуулалт, эсийн ялгах зохицуулалт, тунг зохицуулах зэрэгт оролцдог. хүний ​​өвчлөлийн үүсэл, хөгжил, урьдчилан сэргийлэлт, одоогийн байдлаар биоанагаах ухааны салбарын халуун цэгүүдийн нэг юм.

01  LncRNA-ийн төрөл ба шинж чанарууд

lncRNA нь үүсэх янз бүрийн эх сурвалжийн дагуу олон төрөлд хуваагддаг бөгөөд үүнийг дээрх зурагт үзүүлэв.Дараах шинж чанаруудтай.

1. lncRNA-ууд нь ихэвчлэн урт, динамик илэрхийлэл, ялгах явцад өөр өөр залгах аргуудтай байдаг
2. Кодлох гентэй харьцуулахад lncRNA нь ихэвчлэн бага экспрессийн түвшинтэй байдаг
3. Ихэнх lncRNA нь эд эсийн ялгарал, хөгжлийн явцад тодорхой цаг хугацаа, орон зайн илэрхийлэлийн өвөрмөц онцлогтой байдаг.
4. Хавдар болон бусад өвчний шинж тэмдэг илэрдэг
5. lncRNA-ийн дэд эсийн байрлал нь олон янз байдаг
6. Дараалал нь хадгалалт багатай боловч функц нь тодорхой хэмжээний хадгалалттай гэх мэт.

02 LncRNA урвуу транскрипцийн талаар байнга асуудаг асуултууд

Эсэд агуулагдах lncRNA-ийн агууламж бага, урт урт, өндөр түвшний бүтэцтэй тул ийм РНХ нь ихэвчлэн ишний гогцоо эсвэл үсний хавчаар зэрэг нарийн төвөгтэй бүтэцтэй байдаг ба RT-qPCR нь урвуу транскрипц амжилтгүй эсвэл үр ашиг багатай байдаг.

03 LncRNA урвуу транскрипцийн шийдэл

Төв дүрмийн дагуу РНХ-ийн вирүсийг өөрийн урвуу транскриптаза ашиглан РНХ-ийг загвар болгон ашиглан ДНХ нэгтгэх үйл явцыг урвуу транскрипц гэж нэрлэдэг.РНХ вирүсийн урвуу транскриптаза ашиглан cDNA загварыг in vitro нийлэгжүүлэх үйл явцыг урвуу транскрипц гэж нэрлэдэг.Урвуу транскрипцийн системд багтсан гол элементүүд: РНХ загвар, урвуу транскриптаза, праймер болон бусад бүрэлдэхүүн хэсгүүд.

1.РНХ загвар

РНХ-ийн загвар урвуу транскрипцид үзүүлэх нөлөө нь түүний бүтэц, цэвэр байдал, бүрэн бүтэн байдалд тусгагдсан байдаг.Олж авсан РНХ-ийн цэвэр байдал, бүрэн бүтэн байдал өндөр байх тусам урвуу транскрипцийн үр ашиг өндөр байх ба дараагийн тоон үр дүн илүү нарийвчлалтай болно.Түгээмэл хэрэглэгддэг РНХ хандлах урвалжаар цэвэршүүлсэн РНХ нь ихэнх урвуу транскриптазыг дарангуйлах хүчтэй нөлөө бүхий архи, гуанидины давсны үлдэгдэл агуулдаг.

2. Урвуу транскриптаза

Урвуу транскриптаза нь урвуу транскрипцийн бүх системд гол нөлөө үзүүлдэг.Ихэнх лабораторид ашигладаг урвуу транскриптазын тохиромжтой температур нь ерөнхийдөө 42 ° C байна.Үнэн хэрэгтээ, өндөр түвшний РНХ-ийн бүтцийг нээх нь илүү өндөр температур шаарддаг бөгөөд урвуу транскриптазын шаардлага өндөр байдаг.

3.Праймер

Урвуу транскрипцийн праймерууд нь генийн өвөрмөц праймерууд, санамсаргүй праймерууд болон Oligo dT праймеруудыг агуулдаг.Ихэнх lncRNA-д полиА сүүл агуулаагүй бөгөөд Oligo dT-тай санамсаргүй праймеруудыг зөв тохируулах нь чухал юм.

4. Бусад бүрэлдэхүүн хэсгүүд

РНХ нь задрахад маш хялбар байдаг тул урвуу транскрипцийн системд бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн нэвтрэлтийг багасгах боломжтой бөгөөд энэ нь RNase-ийн нэвтрэлтийг үр дүнтэйгээр сэргийлж, урвуу транскрипцийн жигд явцыг хангах болно.

FорегенqPCR руу урвуу транскрипцийг РНХ загвараас авдаг

Өөрийн lncRNA илрүүлэлтийг иж бүрэн дагалдана

Амьтны нийт РНХ IуусмалИж бүрдэл (гДНХ арилгах баганатай)

Эсийн нийт РНХ IуусмалИж бүрдэл (гДНХ арилгах баганатай)

Lnc-RT HeroTM I(gDNase-тай)(lncRNA-аас эхний хэлхээний cDNA-ийн нийлэгжилтэнд зориулсан Super Premix)

Бодит цагийн PCR EasyTM-SYBR Green I

Aдавуу тал ofРНХ олборлолт:

Энэхүү иж бүрдэл нь гурав дахь үеийн РНХ олборлох технологийг ашигладаг тул DNase ашиглах шаардлагагүй.

96, 24, 12, 6 цооногийн хавтангаар өсгөвөрлөсөн эсээс 11 минутын дотор гДНХ агуулаагүй, өндөр цэвэршилттэй, өндөр чанартай нийт эсийн РНХ-ийг өндөр үр ашигтайгаар гаргана.

lncRNA урвуу транскрипцийн давуу талууд:

Геномын ДНХ-ийн бохирдлыг хурдан арилгахын тулд LncRNA-д зориулан тусгайлан боловсруулсан урвуу транскрипцийн систем.

Урвуу транскрипцийн систем нь өндөр дулааны тогтворжилттой бөгөөд 50 ° C-д урвуу транскрипцийн сайн гүйцэтгэлтэй хэвээр байна.

Өндөр GC агуулгатай, нарийн төвөгтэй хоёрдогч бүтэцтэй загваруудыг өндөр үр ашигтайгаар эргүүлж болно.

Давуу талof qПГУ:

Hot start Foregene Taq Polymerase нь өсгөлтийн үр ашиг, өсгөлтийн мэдрэмж өндөр, өсгөлтийн өвөрмөц чанар өндөртэй.

Оновчтой бодит ПГУ-ын хялбар холимог нь SYBR Green I-ийг илүү мэдрэгчтэй болгодог бөгөөд флюресценцийн эрч хүч нь ижил төрлийн бүтээгдэхүүнээс 3-5 дахин их байдаг бөгөөд энэ нь янз бүрийн төрлийн флюресценцийн тоон туршилтын хэрэгцээг хангах боломжтой юм.