Та хэр ихийг мэдэх вэ

Н тухайюклейн хүчлийн олборлолт

Цэвэршүүлсэн нуклейн хүчлийн эхлэл ба төгсгөл

Эхэндээ бүх зүйл хэцүү байдаг, цэвэршүүлсэн нуклейн хүчил хамгийн их байдаг

Дараагийн туршилтуудад зориулж молекулын туршилтыг эхлүүлэх

Амжилт эсвэл бүтэлгүйтэл нь чухал нөлөө үзүүлдэг.

Ул мөр/хэт ул мөр хэт ягаан туяаны спектрофотометр нь нуклейн хүчлийн концентраци болон уураг, давсны ионы үлдэгдлийг энгийн, хурдан бөгөөд хэмнэлттэй илрүүлдэг тул олон эрдэмтдийн дуртай байдаг.

Бидний мэдэж байгаагаар A260 нь нуклейн хүчлийн шингээлтийн OD утга, A280 нь уургийн концентрацийн шингээлтийн OD утга, А230 нь давсны ионы концентрацийн шингээлтийн OD утга, тиймээс A260 нь нуклейн хүчлийн концентрацийг, A260/280 нь уургийн үлдэгдэл, A260/230 нь давсны ионы үлдэгдэл гэсэн үг, гэхдээ энэ нь зөвхөн судалгааны үр дүнд тулгуурласан олон тооны хэмжилтийн үр дүн юм.уламжлалт” ДНХ, РНХ-ийн цэвэр байдлыг тайлбарлаж чадна гэдэгт итгэхтодорхой хэмжээгээр.Энэ нь нуклейн хүчлийн гарц, цэвэр байдлыг тодорхойлох цорын ганц стандарт биш бөгөөд зөвхөн лавлагаа болгон ашигладаг бөгөөд энэ нь "алтан стандарт" биш юм.

Thermo Fisher ND-2000 гарын авлага нь туршилтын үр дүнгийн найдвартай байдлыг онцолдог

Учир нь микро/хэт микро хэт ягаан туяаны спектрофотометр ашиглан олж авсан үр дүн нь зөвхөн нуклейн хүчлийн гарц, цэвэр байдлыг хажуу талаас нь харуулдаг бөгөөд нөлөөлөх олон хүчин зүйл (оптик зам, дээжийн хэмжээ, дээжийн концентраци, рН-ийн утга, шингээлтийн хэмжилтэд нөлөөлдөг бусад ионууд гэх мэт) байдаг тул хэмжсэн OD утга нь үнэн зөв байх албагүй.Үүний зэрэгцээ шингээлтийн утгыг тодорхойлох материалын өвөрмөц чанар байхгүйгээс нэг хэлхээтэй ДНХ, хоёр судалтай ДНХ, РНХ, dNTP болон зарим уургууд бүгд 260 нм долгионы уртад шингээлтийн дээд цэгтэй байдаг ба зөвхөн A260-аар тодорхойлсон концентраци нь жинхэнэ ДНХ эсвэл РНХ байх албагүй.Төвлөрөл, түүний бүрэн бүтэн байдал, доройтлыг шүүх боломжгүй юм.

Тэгвэл манай цэвэршүүлсэн нуклейн хүчлийн чанарыг хэрхэн дүгнэх вэ?Илрүүлэхийн тулд микро/хэт микро хэт ягаан туяаны спектрофотометр ашиглахаас гадна нуклейн хүчлийн цэвэр, бүрэн бүтэн байдлыг нүдээр харуулах, концентрацийг тодорхой хэмжээгээр харуулах агароз гель электрофорез зэрэг аргууд шаардлагатай.Ийм байдлаар янз бүрийн аргын илрүүлэлтийн үр дүнд олж авсан нуклейн хүчлийн гарц, цэвэр байдал нь найдвартай байдаг.

Туршилтын график харьцуулалт

H1299 эсийн геномын ДНХ-ийг А компанийн ДНХ экстракцийн иж бүрдэл ашиглан гаргаж авсан бөгөөд их хэмжээний хольцын бохирдол илэрсэн бөгөөд үүний үр дүнд OD-ийн өндөр үзүүлэлт гарсан.

(OD хэмжилтийн утга ба харгалзах электроферограмм)

Үнэлгээний индекс

Нуклейн хүчлийн гарц, чанарыг шалгах “алтан стандарт” бий юу?

Бидний мэдэж байгаагаар энгийн, хурдан, хямд арга байхгүй.Спектрофотометр, гель электрофорез, масс спектрометрийн аль нь ч бай уусмал дахь нуклейн хүчлийн концентраци, цэвэршилтийг өөр өөр талаас нь тусгадаг бөгөөд тэдгээрийг бие биенээсээ хамааруулан дүгнэх шаардлагатай.

Хамгийн сайн үнэлгээний индекс нь үргэлж байдагдараагийн туршилтын хэрэглээ.Энэ нь урвуу транскрипц болон ПГУ-ын олшруулалтын үр ашигт нөлөөлдөггүй.Найдвартай олшруулалтын бүтээгдэхүүн ба Ct утгыг олж авах, дарааллаар нь бүрэн дарааллыг олж авах нь нуклейн хүчлийн олборлолт амжилттай болно.

Дүгнэж хэлэхэд, зөвхөн харьцааны онолын үзэл бодлыг "сайн сорьцын сайн үр дүнг олборлох параметр болгон ашиглах" гэсэн үзэл бодлоор эсэргүүцэх хэрэгтэй!

ДНХ/РНХ-ийн өндөр цэвэршилтийг авахын тулд санал болгож буй Foregene ДНХ РНХ олборлох иж бүрдэл:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/