Саяхан би гайхалтай зүйлийг олж мэдсэн!Түүний эргэн тойрон дахь олон дэвшилтэт туршилтын мэргэжилтнүүд туршилтын мэдлэгийн зарим нэг энгийн цэгүүдийг ч мэддэггүй.

Жишээлбэл, та дараах асуултуудад хариулж чадах уу?

OD260 болон A260 хооронд ялгаа бий юу?Тус бүр нь юу гэсэн үг вэ?
OD нь оптик нягтралын товчлол (оптик нягтрал), А нь шингээлтийн (шингээлтийн) товчлол, хоёр ойлголт нь үнэндээ ижил, "оптик нягтрал" нь "шингээх" боловч "оптик нягтрал" нь ихэнх үндэсний стандартад нийцэж, илүү стандартчилагдсан байдаг.

Нуклейн хүчлийн концентрацийг тооцоолохын тулд бид ихэвчлэн OD утгыг 260 нм-д хэмждэг, тэгвэл 1OD юуг илэрхийлдэг вэ?
Нуклейн хүчил нь 260 нм долгионы урттай хамгийн их шингээлтийн оргилтой бөгөөд энэ нь ДНХ ба РНХ, түүнчлэн хуваагдсан нуклейн хүчлийн хэсгүүдийг агуулдаг (энэ нь гол цэг юм).
260 нм долгионы уртад хэмжсэн OD утгыг OD260 гэж тэмдэглэв.Хэрэв дээж цэвэр бол OD260 утга нь нуклейн хүчлийн дээжийн концентрацийг тооцоолж болно.
1 OD260=50 мкг/мл dsDNA (хоёр хэлхээтэй ДНХ)
=37 мкг/мл ssDNA (нэг судалтай ДНХ)
=40 мкг/мл РНХ
=30 мкг/мл dNTPs (олигонуклеотид)
RT-PCR, Realtime-PCR болон QPCR хоёрын хооронд ямар нэгэн холбоо, ялгаа бий юу?
RT-PCR гэдэг нь урвуу транскрипцийн ПГУ-ын товчлол юм
Real Time PCR=qPCR, Quantitative Real Time PCR гэсэн үгийн товчлол
Хэдийгээр бодит цагийн ПГУ (бодит цагийн флюресцент тоон ПГУ) ба урвуу транскрипцийн ПГУ (урвуу транскрипцийн ПГУ) хоёулаа RT-PCR гэж товчилсон мэт санагддаг.Гэхдээ олон улсын конвенцид: RT-PCR нь урвуу транскрипцийн ПГУ-ыг тусгайлан хэлдэг.

Биологид ДНХ/РНХ-ийн уртыг тодорхойлоход өргөн хэрэглэгддэг nt, bp, kb гэж юу вэ?
nt = нуклеотид
bp = үндсэн хос үндсэн хос
кб = килобаза

Мэдээжийн хэрэг, олон хүмүүс эдгээр жижиг нарийн ширийн зүйлийг анхаарч үздэггүй гэж та хэлэх болно!Хүн бүр үүнийг хийдэг бөгөөд энэ нь юу болохыг хэн ч танаас асуухгүй.Энэ шаардлагагүй гэдгийг та мэдэж байгаа биз дээ?

Үгүй, Үгүй, Үгүй, үүнийг мэдэх нь маш чухал юм!юунаас болоод?
Учир нь та нийтлэл оруулахыг хүсч байна!Ах!Та сургуулиа төгсөх гэж байгаа эсвэл шинжлэх ухааны судалгааны ололт амжилтыг эрэлхийлж байгаа эсэхээс үл хамааран ярихдаа нийтлэлд найдах ёстой!

Нуклейн хүчлийн олборлолт нь хамгийн энгийн бөгөөд үндсэн туршилт байх ёстой.Нуклейн хүчлийн олборлолтын чанар нь дараагийн туршилтуудын үр дүнг шууд тодорхойлдог.

Хэдий олон удаа хэлсэн ч тоодоггүй нөхөд олон байна.Энэ удаад би нийтлэлээс гарахаар шийдсэн!

MIQE гэгддэг бодит цагийн ПГУ-ын тоон туршилтыг нийтлэх хамгийн бага мэдээлэл, нь флюресценцийн тоон ПГУ-ын туршилтыг үнэлэх, нийтлэл хэвлэхэд шаардлагатай туршилтын мэдээллийн доод стандартыг санал болгодог флюресценцийн тоон туршилтын удирдамжийн багц юм.Туршилтын нөхцөл, шинжилгээний аргуудаар дамжуулан шүүмжлэгч нар судлаачийн туршилтын схемийн үнэн зөвийг илүү сайн үнэлэх боломжтой.

Эндээс харахад нуклейн хүчлийн олборлолтын хэсэгт дараахь илрүүлэх зүйлсийг санал болгосон.

"Д" нь өгөх ёстой мэдээллийг, "D" нь шаардлагатай бол өгөх ёстой мэдээллийг заана.

Маягт нь маш төвөгтэй, үнэндээ хүн бүр үүнээс эхлэх хэрэгтэй гэж хэлмээр байна

Нуклейн хүчлийг эдгээр дөрвөн талаас нь үнэлэхийн тулд цэвэр байдал (D), гарц (D), бүрэн бүтэн байдал (E) ба тууштай байдал (E).

Туршилтын зуршлын дагуу эхлээд цэвэр ариун байдал, төвлөрлийг үнэлэх аргуудын талаар ярих хэрэгтэй.

OD хэмжилт нь туршилтанд оролцогчдын дуртай бөгөөд хамгийн хялбар илрүүлэх арга юм.Зарчмын хувьд би энд дэлгэрэнгүй ярихгүй.Одоо олон лабораториуд нуклейн хүчлийн дээжийг шууд тоон байдлаар шинжлэхэд хэт микро спектрофотометр ашигладаг.Уг програм нь шингээлтийн утгыг харуулахын зэрэгцээ концентрацийн утга (нуклейн хүчил, уураг, флюресцент будаг) болон холбогдох харьцааг шууд өгдөг.OD утгын шинжилгээний хувьд энэ зургийг хадгалаарай, та зүгээр байх болно.

Бүх нийтийн OD утгын шийдлийн жагсаалт

Гэсэн хэдий ч танд тусад нь авчрах хэд хэдэн анхааруулга байна.

(Эцсийн эцэст, би та нарыг хуримтлуулж, хэрэгцээтэй болтол хүлээх хүмүүс байх ёстой гэдгийг би мэднэ!)

Тайлбар 1 Тоног төхөөрөмж

OD утгад өөр өөр төхөөрөмж нөлөөлнө.OD260 нь тодорхой хязгаарт байгаа л бол OD230 болон OD280-ийн утга нь утга учиртай.Жишээлбэл, энгийн Eppendorf D30-ийн 260 нм-ийн гэрэл шингээх хүрээ 0~3А, Thermo-ийн NanoDrop One нь 260нм байна.0.5~62.5А шингээлтийн хүрээ.

Тайлбар 2Шингэрүүлэх урвалж

OD утга нь янз бүрийн урвалжуудын шингэрүүлэлтэд нөлөөлж болно.Жишээлбэл, рН-ийн цэвэршүүлсэн РНХ-ийн OD260/280 заалт7.5 10мм Трисдотор байх үед буфер нь 1.9-2.1 хооронд байнатөвийг сахисан усан уусмалхарьцаа бага байх болно, магадгүй зөвхөн 1.8-2.0, гэхдээ энэ нь РНХ-ийн чанар өөрчлөгддөг гэсэн үг биш юм.

Тайлбар 3Үлдэгдэл бодисууд

Үлдэгдэл бодис байгаа нь нуклейн хүчлийн концентрацийг хэмжих нарийвчлалд нөлөөлөх тул нуклейн хүчлийн дээжинд уураг, фенол, полисахарид, полифенолын үлдэгдэлээс аль болох зайлсхийх шаардлагатай.

Гэвч үнэн хэрэгтээ органик урвалжаар олборлох нь хуучин арга юм.Арилжааны иж бүрдэлд цахиурт суурилсан шингээх баганыг центрифуг хийх, арилгахад хэцүү хорт болон хортой органик урвалжаас зайлсхийх гэх мэтээр дамжуулан олборлох үр нөлөөг олж авах боломжтой. Асуудал, тухайлбалForegene-ийн нуклейн хүчлийг ялгах иж бүрдэл нь үйл ажиллагааны туршид DNase/RNase болон хортой органик урвалжуудыг ашигладаггүй, хурдан бөгөөд аюулгүй, болоннөлөө байнасайн(санамсаргүйгээр халзан гэж хэлсэн, гэхдээ би чамайг мэдэхийг хүсч байгааг мэдэж байна).

Жишээ 1: Геномын ДНХ-ийн олборлолтын гарц ба цэвэр байдал

Foregene Soil DNA Isolation Kit (DE-05511) нь янз бүрийн эх сурвалжаас авсан хөрсний дээжийг боловсруулдаг бөгөөд олж авсан геномын ДНХ-ийн хэмжээ, цэвэр байдлыг дараах хүснэгтэд үзүүлэв.
Жишээ 2: Эдийн РНХ олборлох гарц ба цэвэр байдал

Амьтны нийт РНХ тусгаарлах иж бүрдэл (RE-03012) янз бүрийн эдийн дээжийг боловсруулсан бөгөөд олж авсан РНХ-ийн хэмжээ, цэвэр байдлыг доорх хүснэгтэд үзүүлэв (хулганы эдэд):
Гэсэн хэдий ч та OD утгыг дуусгасан гэж бүү бодоорой.Танд миний урд талд зурсан гол цэгүүдийг анхаарч үзэх зүйл байна уу?

Анхаар

Мөн шингээлтэд хуваагдсан нуклейн хүчлийн молекулуудыг тооцоолно.Таныг РНХ-д геномын ДНХ-ийн үлдэгдэл байгаа гэж үзвэл таны OD утга маш өндөр байх боловч РНХ-ийн бодит концентрацийг тодорхойлох боломжгүй.Таны РНХ байгаа эсэх нь доройтол байгаа эсэх нь тодорхойгүй байгаа тул илүү нарийвчлалтай дүгнэлт гаргахын тулд бидэнд MIQE-д дурдсан нуклейн хүчлийн бүрэн бүтэн байдлын үнэлгээг хийх цогц үнэлгээний арга хэрэгтэй хэвээр байна.