Цавуугийн нөхөн сэргэлтийг сайжруулах зөвлөмжүүд

1. Электрофорезын үед дээжийн ачааллыг нэмэгдүүлэх.

2. Шинэхэн бэлтгэсэн электрофорезын буфер хэрэглэнэ.

3. Цавуу зүсэхдээ цавуу зүсэх хэмжээг багасгахын тулд зөвхөн тууз бүхий цавууг таслахыг хичээ: цөөн зориулалтын хэлтэрхий бүхий цавуу хэрэггүй, эс тэгвээс энэ нь нөхөн сэргээх хурдад нөлөөлнө.

4. Хоёр ба түүнээс дээш цавуу хайлж дууссаны дараа хэчнээн том хэмжээтэй байсан ч хоолойг хэрэглэж, нэг баганад шилжүүлнэ.

5. Зольд нэмсэн уусмал нь арай илүү байж болох бөгөөд энэ нь ДНХ-ийг мембрантай холбоход илүү тустай боловч ерөнхийдөө 750ul-аас хэтрэхгүй.

6. Гель сэргээх гол зүйл бол багана дахь уусмалын давсны концентраци, хүчиллэг (цэнэг) болон гидрофобик чанараар дамжуулан ДНХ-ийг баганад холбох явдал юм.Тиймээс хэрэв электрофорез буферийн рН хэт өндөр байвал уусмалд 10ul (рН 5.0, 3моль/л NaAC) нэмж болно;мембран дээрх ДНХ-ийн молекулуудыг илүү сайн саатуулахын тулд цавууг уусгасны дараа 30% изопропанол нэмж шингэн рүү халааж болно.

7. Угаагч бодис нэмэхийн өмнө этилийн спиртийг бүрэн ууршуулахын тулд баганыг тасалгааны температурт хэдэн минут (10 минут орчим) байлгана.

8. Эцэст нь нөхөн сэргээх хэмжээг багасгахын тулд бага уусгагч нэмнэ.Ерөнхийдөө 30-50мкл элюентийг шүүрүүлэхэд ашигладаг (хэт бага биш, эс тэгвээс энэ нь хальслахад тохиромжгүй мембраныг норгох боломжгүй);мембрантай холбогдсон ДНХ-ийг бүрэн ялгаруулахын тулд ялгах дуслууд нь мембраны төвд байдаг.

9. Угаагч бодис нэмсний дараа 55 градусын усан ваннд 5 минутын турш эсвэл 50 градусын усан ваннд 10 минутаас дээш хугацаагаар эсвэл 4 градусын температурт парафилмээр битүүмжилж, маргааш нь центрифуг хийж нөхөн сэргээхэд сайн нөлөө үзүүлдэг.

10. Центрифуг хийсэн элюатыг дахин шингээх баганад нэмээд дахин центрифуг хийнэ.

ПГУ-ын бүтээгдэхүүнийг сэргээх нарийвчилсан арга, журам

1. Энгийн резинийг дахин боловсруулах

Хэрэв та цавууг сэргээхийг хүсвэл иж бүрдэл ашиглах нь хамгийн тохиромжтой бөгөөд энэ нь тохиромжтой бөгөөд нөхөн сэргээх хурд нь арай өндөр байдаг.Хэрэв та үнэхээр гараар сэргээх шаардлагатай бол цавууг огтолсны дараа ТЭ-ийн эзлэхүүнийг 3 дахин нэмж болно.Усан халаагуурт хайлсны дараа фенол, фенол/хлороформыг цэвэрхэн гаргаж авч, этанолыг тунадасжуулна.Ингээд л болоо.

2. Хайлах температур багатай гельээс ДНХ-г сэргээх

ДНХ-ийн хэсгүүдийг цэвэршүүлэх Гельний эзэлхүүнтэй тэнцэх TE (10 ммоль/л Tris-HCl pH8.0, 0.1 ммоль/л EDTA) нэмээд 65°С-ийн усан ваннд 5 минут байлгаад гелийг бүрэн уусгана.

Өрөөний температурт хүргэсний дараа тэнцүү хэмжээний фенол (дээд давхаргад ТЭ-ээр ханасан, TE битүүмжилж, фенолын доод давхаргыг арилгасан) нэмж, хольцыг зөөлөн хольж (холих шаардлагагүй) 12,000 эрг / мин-т 3 минутын турш центрифуг хийнэ.1-2 удаа давтана.

Үүссэн бодисыг авч, 0.1 эзэлхүүнтэй 3моль/л натрийн ацетат (рН 5.2), абсолют этанолыг 2.5 дахин их хэмжээгээр нэмж этанолын тунадасжилтыг хийнэ.Цэвэршүүлсэн ДНХ-ийг зохих хэмжээний ТЭ-ээр уусгаж, агуулгыг хэмжиж, хэрэглэхэд бэлтгэнэ (энэ нь зорилтот генийн бүтцийн шинжилгээ, зонд бэлтгэх гэх мэт).

3. Сайн олшруулах өвөрмөц чанар бүхий ПГУ-ын нөхөн сэргээлт

Хэрэв ПГУ-ын олшруулалтын өвөрмөц чанар сайн бол энэ нь ПГУ-ын бүтээгдэхүүнийг энгийн цэвэршүүлэх, сэргээх явдал юм.Та ПГУ-ын бүтээгдэхүүнд 50ug/ml протеиназа К, 37 градусыг 1 цагийн турш нэмж, фенол/хлороформоор нэг удаа хандлах, хлороформоор нэг удаа хандлах ба 0.1 эзэлхүүнтэй дээд давхаргыг нэмж болно.Натрийн ацетатыг 2.5 боть абсолют этанолоор тунадасжуулах замаар гаргаж авсан.

Холбоотой бүтээгдэхүүн:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/