RNase бол РНХ задлах туршилтыг байнга хийдэг олон оюутнуудын сонсохыг хүсдэггүй эмзэг үг юм.Бүрэн зэвсэглэсэн, эцэст нь маш хортой урвалж болох фенол, хлороформоор гаргаж авсан РНХ задарсан.Би эвлэрээгүй байна!!!Өнөөдөр алдарт Rnase-ийн гарал үүслийг харцгаая.

Рибонуклеаз (RNase) эсвэл RNase нь РНХ-ийг жижиг молекул болгон гидролизлэх чадвартай нуклеаз юм.RNase нь жижиг молекул уургийн хувьд ер бусын тогтвортой байдаг .Уламжлалт өндөр температур, өндөр даралтын уурын ариутгал, уургийн дарангуйлагчид үүнийг бүрэн идэвхгүй болгож чадахгүй.RNase-ийн тогтвортой байдал нь гол төлөв бүтэц дэх дисульфидын холбооноос үүсдэг.Жишээлбэл, үхрийн нойр булчирхайн түгээмэл хэрэглэгддэг RNase нь ердөө 124 амин хүчил агуулдаг боловч 4 дисульфидын холбоо агуулдаг.Хүхрийн бонд ба дисульфидын холбоо нь RNase-ийг маш сайн дулааны тогтвортой байдлыг хангадаг.Үүнээс гадна rnase нь харьцангуй бага молекул жинтэй бөгөөд олон тохиолдолд анхны хэлбэрээ хурдан сэргээж чаддаг.

Маш тогтвортой байхаас гаднаRNases лабораторид хаа сайгүй байдаг .RNase нь биологийн хамгаалалтын механизм юм.Эсийн хувьд экзоген РНХ нь ихэвчлэн үхэлд хүргэдэг.Экзоген ДНХ-тэй харьцуулахад экзоген РНХ нь ихэвчлэн илүү аюултай байдаг.РНХ нь аз жаргалтайгаар хөрвүүлж, орчуулагддаг тул бараг бүх организмууд экзоген РНХ-ийн халдлагаас хамгаалахын тулд RNase-ийг хөгжүүлсэн байдаг.Тиймээс лабораторид ургуулсан бактерийн эсүүд болон РНХ-г гаргаж авдаг та RNase-ийн үнэрийг ялгаруулдаг.Хүний биеийн шингэнд (шүлс, нулимс гэх мэт) их хэмжээний RNase агуулагддаг тул РНХ задрах үед уйлж болохгүй.Та уйлах тусам РНХ-ийн доройтол улам дорддог!!Дайю эгч РНХ задлахад тохиромжгүй!

Нэмж дурдахад таны эмзэг арьсанд маш их хэмжээний RNase агуулагддаг бөгөөд арьсанд хүрсэн маркер, пипетк, хөргөгчийн хаалга, хаалганы бариул зэрэг нь RNase агуулдаг.

Маш их эргэлзэж байгаа тул RNases-тай хэрхэн харьцах талаар харцгаая.

РНХ-г арилгахад хүн бүрийн боддог хамгийн эхний зүйлDEPC(диэтил пирокарбонат).DEPC нь голчлон гистидиний RNase идэвхтэй бүлгийн имидазолын цагирагтай нийлж уургийг денатуратлаж, улмаар ферментийн идэвхийг саатуулдаг.0.1% DEPC нь Rnase-д илүү сайн арилгадаг боловч DEPC нь хорт хавдар үүсгэдэг гэдгийг анхаарах хэрэгтэй.

RNase-ийн хувьд бид хоёр талаас нь эхлэх хэрэгтэй.Эхнийх нь эндоген RNase-ийн үйл ажиллагааг дарангуйлах явдал юм

Trizol-д агуулагдах гуанидин изотиоцианат, DTT зэрэг уламжлалт РНХ ялгах урвалжууд нь RNase-ийн дисульфидын холбоог нээх боломжтой боловч зарим RNase, ялангуяа эд эсийн дээжинд байдаг тул бага температурт анхаарлаа хандуулаарай.

1.Эдийн дээжийг гаргасны дараа тэр даруй шингэн азот, эсвэл арилжааны РНХ хадгалах уусмалд дүрнэ.

2.Эсийн дээжээс РНХ-г гарган авсны дараа задралын уусмалд нэмээд мөсөн хайрцагт задлана.

3. Нунтаглахад шингэн азотыг ашиглах нь хамгийн тохиромжтой эд эсийн дээжийг нэгэн төрлийн болгох үед.Шингэн азотгүй цахилгаан гомогенжүүлэгчийг ашиглахдаа нэгэн төрлийн адаптерийг бүрэн хөргөхөд анхаарах хэрэгтэй.

Хоёр дахь нь экзоген DNase юм

1.Бүрэн зэвсэглэсэн, лабораторийн дээл өмсөж, амны хаалт зүүж, шинэ бээлий өмсөхөө мартуузай (битгий ийм хэмнэлттэй бай! Тризол нь хэт идэмхий, бээлийээр дамжин маш хүчтэй байдаг тул гар дээрээ дусааж болохгүй).

2.Ашигласан бүх пипеткийн үзүүрүүд, EP хоолой, ПГУ-ын хоолой болон бусад тоног төхөөрөмжийг RNase-ээс цэвэрлэх шаардлагатай.Үүнийг 0.1% DEPC-д дэвтээж, дараа нь өндөр даралтын дор дарах боломжтой.Утааны бүрхүүлд ажиллахад анхаарлаа хандуулаарай.Орон нутгийн дарангуйлагчид ферментийг зайлуулах зориулалттай хэрэглээний материалыг шууд худалдаж авах боломжтой.

Жич: Залхуу арга хэлье.Хэдийгээр өндөр температур, өндөр даралт нь RNase-ийг бүрэн устгаж чадахгүй ч энэ нь түүний ихээхэн хэсгийг арилгах болно.2 удаа өндөр температур, өндөр даралтын нөлөө сайн, РНХ-ийн ханд нь бага нөлөө үзүүлдэг.

3.Архи нь уургийг денатурат болгодогтиймээс РНХ олборлох хүснэгтийг 75%-ийн спиртээр арчиж болно , мөн бээлийд архи цацаж болно.

4.Эцсийн РНХ уусгах уусмал ба центрифугийн хоолойг мөн RNase-ээс цэвэрлэх шаардлагатай.DEPC ус нь түгээмэл хэрэглэгддэг РНХ уусгах уусмал юм.DEPC усыг зөв бэлтгэх аргын талаар ярилцъя (худалдан авахдаа DEPC-г дахин савлахаа мартуузай)

DEPC-ийг 1:1000 хэмийн хэт цэвэр усанд хийж, сайтар сэгсэрч, 370С-т хонуулж, өндөр температур, өндөр даралтын дор 1210С-т 15 минут ариутгана.DEPC усыг -20°С хэмд 1 мл-ийн аликвотоор хадгалах боломжтой.

Эцэст нь дүгнэхэд: бага температур нь гол зүйл, хэрэглээний материалыг сайн зохицуулдаг, бүрэн зэвсэглэсэн, бага ярьдаг!

За, өнөөдрийн стратегийн хувьд ийм л байна.Таны хэлсэн бүх РНХ-ийн концентраци, цэвэр ариун байдлыг хүсэн ерөөе.A260/A280 хоёулаа 2.0 байна!!!

Мэдээж хэрэг, хэрэв та aөрөөний температурт ажиллах РНХ олборлох иж бүрдэл, та дээрх асуудалтай тулгарахгүй байж магадгүй.

Өрөөний температурт үйл ажиллагаа нь DNase нэмэлгүйгээр эсээс нийт РНХ-ийг 11 минутын дотор, амьтны эд, ургамлаас нийт РНХ-ийг 30 минутын дотор гаргаж авдаг.

Туршилтын дээж авахыг хүсвэл дараах хаягаар холбогдоно уу.overseas@foregene.com

Холбоотой бүтээгдэхүүн:

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/