Амьтны нийт РНХ тусгаарлах иж бүрдэл Амьтны эд, эсэд зориулсан нийт РНХ ялгах, цэвэршүүлэх иж бүрдэл
Багцын тодорхойлолт:
Төрөл бүрийн амьтны эд эсээс өндөр цэвэршилттэй, өндөр чанартай нийт РНХ-ийг хурдан бөгөөд үр дүнтэй гаргаж авна.
РНХ-ийн задралын талаар санаа зовох шаардлагагүй.Бүхэл бүтэн систем нь RNase-гүй
ДНХ цэвэрлэх баганыг ашиглан ДНХ-г үр дүнтэй устгана
DNase нэмэлгүйгээр ДНХ-г устгана
Энгийн-бүх үйлдлүүд нь өрөөний температурт хийгддэг
Хурдан - 30 минутын дотор үйл ажиллагааг дуусгах боломжтой
Аюулгүй - органик урвалж ашиглаагүй
Өндөр цэвэршилттэй—OD260/280≈1.8-2.1
Багцуудын тодорхойлолт
50 бэлтгэл, 200 бэлтгэл
Энэхүү хэрэгсэл ньэргэх багана ба томъёоМанай компаний боловсруулсан бөгөөд амьтны төрөл бүрийн эд эсээс өндөр цэвэршилттэй, өндөр чанартай нийт РНХ-ийг өндөр үр ашигтайгаар гаргаж авах боломжтой. Энэ нь ДНХ-цэвэрлэх баганыг үр ашигтайгаар хангадаг бөгөөд энэ нь геномын ДНХ-ийг супернатант болон эд эсийн лизатаас амархан ялгаж, шингээж авах боломжтой бөгөөд энгийн бөгөөд цаг хугацаа хэмнэдэг;Зөвхөн РНХ багана нь РНХ-г үр дүнтэй холбож чаддаг бөгөөд олон тооны дээжийг өвөрмөц томъёогоор нэгэн зэрэг боловсруулах боломжтой.
Бүхэл систем нь RNase-гүй, ингэснээр олборлосон РНХ задрахгүй;Буфер RW1, Buffer RW2 буфер угаах систем, ингэснээр олж авсан РНХ нь уураг, ДНХ, ион, органик нэгдлүүдийн бохирдлоос ангид байх болно.
Иж бүрдэл хэсгүүд
| Амьтны нийт РНХ тусгаарлах хэрэгсэл | ||
| Иж бүрдэл хэсгүүд | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 Т | 200 Т | |
| Буфер RL1* | 25 мл | 100 мл |
| RL2 буфер | 15 мл | 60 мл |
| RW1 буфер* | 25 мл | 100 мл |
| RW2 буфер | 24 мл | 96 мл |
| RNase-гүй ddH2O | 10 мл | 40 мл |
| Зөвхөн РНХ багана | 50 | 200 |
| ДНХ цэвэрлэх багана | 50 | 200 |
| Заавар гарын авлага | 1 ширхэг | 1 ширхэг |
Бүтээгдэхүүний мэдээлэл
| Формат | Багана эргүүлэх | Цэвэршүүлэх бүрэлдэхүүн хэсэг | Гадны багана, урвалж |
| Урсгал | 1-24 дээж | Бэлтгэх хугацаа | ~30 мин (24 дээж) |
| Центрифуг | Ширээний центрифуг | Пиролизийн тусгаарлалт | Төвөөс зугтах тусгаарлалт |
| Дээж | Амьтны эд;эс | Дээжийн хэмжээ | Эд: 10-20 мг;Нүд:(1-5)×106 |
| Уусмалын хэмжээ | 50-200 мкл | Хамгийн их ачаалах хэмжээ | 850 мкл |
Онцлог, давуу тал
■ РНХ-ийн задралын талаар санаа зовох шаардлагагүй;Бүх систем нь RNase-гүй
■ ДНХ-г ашиглан ДНХ цэвэрлэх баганыг үр дүнтэй устгана
■ DNase нэмэлгүйгээр ДНХ-г устгана
■ Энгийн-бүх үйлдлүүд нь өрөөний температурт хийгддэг
■ Хурдан үйл ажиллагааг 30 минутын дотор дуусгах боломжтой
■ Аюулгүй-органик урвалж шаардлагагүй
■ Өндөр цэвэршилттэй -OD260/280≈1.8-2.1
Иж бүрдэл програм
Энэ нь төрөл бүрийн шинэ эсвэл хөлдөөсөн амьтны эд эс эсвэл өсгөвөрлөсөн эсээс нийт РНХ-ийг гаргаж авах, цэвэршүүлэхэд тохиромжтой.
Бүтээгдэхүүний параметрүүд
■ Доод урсгалын хэрэглээ: эхний хэлхээний cDNA синтез, RT-PCR, молекул клонжуулалт, Northern Blot гэх мэт.
■ Дээж: амьтны эд, өсгөвөрлөсөн эсүүд
■ Тун: Эд 10-20мг, эс (2-5)×106
■ Цэвэршүүлэх баганын ДНХ-г холбох хамгийн дээд хүчин чадал: 80 мкг
■ Уусмалын хэмжээ: 50-200 мкл
Диаграм
Амьтны нийт РНХ тусгаарлах иж бүрдэл 20 мг
Шинэ хулганы дээж, 5% цэвэршүүлсэн нийт РНХ 1% агар авна
Гликогель электрофорез
1: Дэлүү 2: Бөөр
3: Элэг 4: Зүрх
Хадгалалт ба хадгалах хугацаа
Уг иж бүрдлийг тасалгааны температурт (15–25 ℃) 24 сар эсвэл 2–8 хэмд илүү удаан хугацаагаар хадгалах боломжтой.RL1 буферийг β-меркаптоэтанол (заавал биш) нэмсний дараа 1 сарын турш 4 хэмд хадгалж болно.
Иш татсан нийтлэлүүд
1.Хэрэв: 18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R., et al.Төвийн нийлмэл дизайныг оновчтой болгох замаар элэгний суурийг засварлахад зориулсан мРНХ-аар дүүрсэн липидтэй төстэй нано хэсгүүд.Adv.Чиг үүрэг.Матер.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.Хэрэв: 18.187:Хэ X, Хонг В, Ян Ж, нар.Эмчилгээний үүдэл эсийн бэлдмэл дэх эсүүдийн аяндаа апоптоз нь фосфатидилсерин ялгаруулж дархлааг сайжруулах нөлөө үзүүлдэг.Дохионы дамжуулалтын зорилтот Ther.2021 оны долдугаар сарын 14;6(1):270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.Хэрэв: 17.97:Dai Z, Liu H, Liao J, et al.N7-Methylguanosine tRNA-ийн өөрчлөлт нь онкогенийн мРНХ-ийн орчуулгыг сайжруулж, элэгний доторх холангиокарциномын явцыг дэмждэг.Мол эс.2021 оны долдугаар сарын 29: S1097-2765 (21) 00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.Хэрэв: 9.225:Цао X, Шу Ю, Чен Ы, нар.Mettl14-Зуучлагдсан m6A өөрчлөлт нь эндоплазмын торлогийн гомеостазыг хадгалах замаар элэгний нөхөн төлжилтийг хөнгөвчилдөг.Cell Mol Gastroenterol гепатол.2021;12(2):633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
РНХ тусгаарлах иж бүрдэл бусад эх сурвалжийн жишээболомжтой байна:
Эс, ургамал, вирус, цус гэх мэт.
РНХ ялгагдаагүй эсвэл РНХ-ийн гарц бага байна
Эдийн дээжийн РНХ-ийн агууламж, үйл ажиллагааны арга, шингэний хэмжээ гэх мэт нөхөн сэргээх үр ашигт нөлөөлдөг олон янзын хүчин зүйлүүд байдаг.
1. Ашиглалтын явцад мөсөн банн эсвэл криоген (4 ° C) центрифуг хийсэн.
Зөвлөмж: Өрөөний температурт (15-25 ° C) бүх процессын турш ажиллуулж, мөстэй усанд хийж, бага температурт центрифуг хийж болохгүй.
2. Дээжийг буруу хадгалсан эсвэл дээж хадгалах хугацаа хэтэрсэн.
Зөвлөмж: Дээжийг -80 °C температурт хадгалах эсвэл шингэн азотонд хөлдөөж, хөлдөөх гэсэлтийн үед давтан хэрэглэхээс зайлсхийх;РНХ олборлоход шинэ эд эс эсвэл өсгөвөрлөсөн эсийг ашиглахыг хичээ.
3. Дээжний задрал хангалтгүй.
Зөвлөмж: Эдийг нэгэн төрлийн болгохдоо эдийг хангалттай нэгэн төрлийн болгож, РНХ ялгарахыг тайлбарлахын тулд эд эсүүд хангалттай хуваагдсан эсэхийг шалгаарай.
4. Угаагч бодисыг зөв нэмээгүй.
Зөвлөмж: RNase-Free ddH гэдгийг баталгаажуулна уу2Цэвэршүүлэх баганын мембраны дунд хэсэгт O дуслаар нэмнэ.
5. Үнэмлэхүй этанолын зөв хэмжээг Buffer RL2 эсвэл Buffer RW2-д нэмээгүй.
Зөвлөмж: Зааврыг дагаж, RL2 Buffer болон Buffer RW2-д үнэмлэхүй этилийн спиртийн зөв хэмжээг нэмж, иж бүрдлийг хэрэглэхийн өмнө сайтар холино.
6. Эд эсийн дээжийн тун нь тохиромжгүй.
Зөвлөмж: 10-20 мг эд эс буюу (1-5) × 10 хэрэглэнэ6500 мкл тутамд эсүүд RL1 буфер, учир нь эдийг хэт их хэрэглэх нь РНХ-ийн олборлолтыг бууруулахад хүргэдэг.
7. Элюцийн хэмжээ зохисгүй буюу бүрэн бус шүүрэл.
Зөвлөмж: Цэвэршүүлэх баганын уусмалын хэмжээ 50-200 мкл;Хэрэв шүүрлийн нөлөө хангалтгүй бол урьдчилан халаасан RNase-Free ddH нэмсний дараа өрөөний температурт байрлуулах хугацааг сунгахыг зөвлөж байна.2O, жишээ нь 5-10 минутын турш.
8. Цэвэршүүлэх баганад Buffer RW2 угаасны дараа этанолын үлдэгдэл байна.
Зөвлөмж: Хэрэв RW2 буферийг угаасны дараа этилийн спиртийн үлдэгдэл байвал 1 минутын турш хоосон хоолойгоор центрифуг хийх бол хоосон хоолойг центрифуг хийх хугацааг 2 минут хүртэл нэмэгдүүлэх эсвэл үлдэгдэл этилийн спиртийг зохих ёсоор зайлуулахын тулд цэвэршүүлэх баганыг тасалгааны температурт 5 минутын турш байрлуулж болно.
Цэвэршүүлсэн РНХ нь доройтдог
Цэвэршүүлсэн РНХ-ийн чанар нь дээжийг хадгалах, RNase-ийн бохирдол, манипуляци гэх мэт хүчин зүйлүүдтэй холбоотой байдаг.
1. Эд эсийн дээжийг хугацаанд нь хадгалдаггүй.
Зөвлөмж: Хэрэв эд эсийн дээж, эсийг цуглуулсны дараа цаг тухайд нь ашиглахгүй бол -80 ° C эсвэл шингэн азотыг нэн даруй крио хадгалах хэрэгтэй.РНХ гаргаж авахын тулд боломжтой бол шинээр авсан эд эс эсвэл эсийн дээжийг ашиглана.
2. Эдийн дээжийг олон удаа хөлдөөх гэсгээх.
Зөвлөмж: Эдийн дээжийг хадгалахдаа хадгалахын тулд жижиг хэсгүүдэд хувааж, дээжийг дахин дахин хөлдөөх, РНХ задрахаас зайлсхийхийн тулд нэг хэсгийг нь авах нь зүйтэй.
3. Үйл ажиллагааны явцад RNase-ийг нэвтрүүлсэн эсвэл нэг удаагийн бээлий, маск зэргийг өмсдөггүй.
Зөвлөмж: РНХ-г задлах туршилтыг РНХ боловсруулах тусдаа өрөөнд хамгийн сайн хийх бөгөөд туршилтын өмнө хүснэгтийг цэвэрлэнэ.
Туршилтын явцад RNase-ийг нэвтрүүлснээс үүдэлтэй РНХ-ийн задралыг багасгахын тулд нэг удаагийн бээлий, маск өмс.
4. Ашиглалтын явцад урвалжууд RNase-ээр бохирдсон байна.
Зөвлөмж: Холбогдох туршилтуудад зориулж шинэ амьтны нийт РНХ тусгаарлах иж бүрдэлээр солино уу.
5. РНХ боловсруулахад ашигладаг центрифугийн хоолой, үзүүр зэрэг нь RNase-ээр бохирдсон байна.
Зөвлөмж: РНХ задлахад ашигласан центрифугийн хоолой, үзүүр, пипетк зэрэг нь бүгд RNase агуулаагүй гэдгийг баталгаажуулна уу.
Цэвэршүүлсэн олж авсан РНХ нь доод туршилтуудад нөлөөлдөг
Цэвэршүүлэх баганаар цэвэршүүлсэн РНХ нь давсны ион, уургийн агууламж хэт их байвал урвуу транскрипц, Northern Blot et al.
1. Элюцлэгдсэн РНХ нь давсны ионы үлдэгдэлтэй.
Зөвлөмж: RW2 буферт этилийн спиртийн хэмжээг зөв нэмсэн эсэхийг баталгаажуулж, ажиллахад заасан төвөөс зугтах хурдаар 2 удаа цэвэршүүлэх баганыг угаах;хэрэв давсны ионы үлдэгдэл байгаа бол цэвэршүүлэх баганыг RW2 буферт тасалгааны температурт 5 минут байлгаад давсны бохирдлыг арилгахын тулд центрифуг хийнэ.
2. Элюцлэгдсэн РНХ-д этилийн спиртийн үлдэгдэл.
Зөвлөмж: RW2 буферийг угаасны дараа хоосон хоолойгоор центрифуг хийх ажиллагааг зааж өгсөн центрифугийн хурдаар хийж, этанолын үлдэгдэл хэвээр байвал хоосон хоолойн центрифуг хийх хугацааг 2 минут хүртэл нэмэгдүүлэх, эсвэл центрифугжуулсан центрифугийг дахин нэмэгдүүлэхийн тулд 5 минутын турш тасалгааны температурт үлдээнэ үү.
