Амьтны Эдийн Шууд ПГУ-ын хэрэгсэл-UNG (Дээж авах хэрэгсэлгүй) Протокол
Багцын тодорхойлолт:
ДНХ-ийг тусад нь ялгахгүйгээр, хурдан бөгөөд өндөр мэдрэмжтэй, ПГУ-ын олшруулалтын загвар болгон амьтны эд эсийн лизатыг шууд ашиглана.Хуурамч эерэг үр дүнг арилгахын тулд UNG бохирдлын эсрэг системийг нэмсэн.
◮ДНХ-ийн цэвэршүүлэлтийг цаг хугацаа их шаарддаг, үнэтэй хийх шаардлагагүй.
◮Түүврийн эрэлт бага, зөвхөн нэг үр ав.
◮Нунтаглах, бутлах зэрэг тусгай эмчилгээ хийх шаардлагагүй, үйл ажиллагаа нь энгийн.
◮Оновчтой ПГУ-ын систем нь ПГУ-д илүү өндөр өвөрмөц чанар, ПГУ-ын урвалын дарангуйлагчдад илүү тэсвэртэй байх боломжийг олгодог.
Тодорхойлолт
Энэхүү иж бүрдэл нь ПГУ-ын урвалд зориулж амьтны эд эсийн дээжээс геномын ДНХ-ийг хурдан гаргахын тулд өвөрмөц лизисын буфер системийг ашигладаг тул том хэмжээний генетикийн шинжилгээ хийхэд тохиромжтой.
Лизисийн буферээс геномын ДНХ-г гаргах үйл явц 65°С-т 10-30 минутын дотор дуусна.Уураг, РНХ-г зайлуулах гэх мэт өөр процесс шаардлагагүй бөгөөд ялгарсан ул мөр ДНХ-ийг ПГУ-ын урвалын загвар болгон ашиглаж болно.
2 × ПГУ хялбарTMMix (UNG) нь 2×PCR Easy үндсэн дээр dTTP-ийн оронд dUTP ашигладагTMХолимог болон UNG фермент (Урацил-N-гликозилаз) нэмдэг бөгөөд энэ нь dUTP агуулсан загварыг нэгэн зэрэг доройтуулдаг.ПГУ-ын урвалын өмнө UNG ферментийг uracil агуулсан ПГУ-ын бүтээгдэхүүнийг задлахад ашигладаг.UNG фермент нь урацил агуулаагүй загварт ямар ч нөлөө үзүүлэхгүй бөгөөд ингэснээр олшруулалтын өвөрмөц байдал, нарийвчлалыг баталгаажуулж, генетикийн томоохон шинжилгээний явцад ПГУ-ын бүтээгдэхүүнийг бохирдуулахаас сэргийлнэ.
D-Taq ДНХ полимераз нь шууд ПГУ-ын урвалд зориулж Foregene-ийн тусгайлан боловсруулсан ДНХ полимераз юм.D-Taq ДНХ полимераза нь олон төрлийн ПГУ-ын урвалын дарангуйлагчдад хүчтэй тэсвэртэй бөгөөд янз бүрийн нарийн төвөгтэй урвалын систем дэх ДНХ-ийн ул мөрийг үр дүнтэй өсгөж чаддаг ба олшруулах хурд нь 2Кб/мин хүрч чаддаг бөгөөд энэ нь ялангуяа Шууд ПГУ-ын урвалд тохиромжтой.
Иж бүрдэл хэсгүүд
| I хэсэг | буфер AL |
| Гадаад протеаз | |
| 6 × ДНХ ачаалах буфер | |
| II хэсэг | 2 × ПГУ хялбарTMХолих(UNG) |
Онцлог, давуу тал
■ДНХ-ийн цэвэршүүлэх цаг хугацаа их шаарддаггүй, үнэтэй байдаг
■ Дээжний хэрэгцээ бага, амьтны эд эсийг 5 мг-аар турших боломжтой.
■ Нунтаглах, бутлах зэрэг тусгай эмчилгээ хийх шаардлагагүй, үйл ажиллагаа нь энгийн.
■ Оновчтой ПГУ-ын систем нь ПГУ-ыг илүү өндөр өвөрмөц чанар, ПГУ-ын урвал дарангуйлагчдад илүү тэсвэртэй болгодог.
■ Бохирдлын эсрэг ПГУ-ын систем 2×ПГУ-ын хялбарTMMix (UNG) нь ПГУ-ын бүтээгдэхүүнээс үүдэлтэй бохирдлыг үр дүнтэй арилгаж, олшруулалтын өвөрмөц байдал, нарийвчлалыг баталгаажуулдаг.
Багцын параметрүүд
Хэрэглээ: төрөл бүрийн амьтны эд.
Дээж задралаас гарсан ДНХ: зөвхөн ПГУ-ын загвар болгон ашигладаг.
Энэхүү иж бүрдлийг дараахь зорилгоор ашиглаж болно: трансгенозыг тодорхойлох, амьтны генотип хийх гэх мэт.
Ажлын урсгал
Хадгалалт ба Хадгалах хугацаа
Энэ багцын I хэсгийг 2-8-д хадгалах ёстой℃.
Буфер AL урвалжийг хуурай нөхцөлд 12 сарын турш хадгалах боломжтой;2-8 хэмд хадгалах боломжтой℃удаан хадгалах зориулалттай.
Foregene Protease урвалж нь өвөрмөц томъёотой.Түүний үйл ажиллагаа, тогтвортой байдлыг хангахын тулд 4-т хадгална уу℃12 сарын турш.
Урвалж 6×ДНХ ачаалах буферийг 4-т хадгалах боломжтой℃эсвэл -20℃урт хугацаанд.
Энэ багцын II хэсгийг -20 хэмд хадгална℃.
Урвалж 2×ПГУ-ын хялбарTMMix(UNG), хэрвээ байнга хэрэглэдэг бол 4 хэмд мөн хадгалж болно℃богино хугацааны хадгалах зориулалттай (10 хоногийн дотор ашиглах).
