Полисахарид ба полифенолоор баялаг ургамалд зориулсан Ургамлын нийт РНХ тусгаарлах иж бүрдэл Plus РНХ цэвэршүүлэх иж бүрдэл
Багцын тодорхойлолт:
Cat.No.RE-05021/05022/05024
Өндөр полисахарид ба полифенолын бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг агуулсан ургамлын ерөнхий дээжээс нийт РНХ-ийг цэвэрлэх зориулалттай.
Полисахарид, полифенолын өндөр агууламжтай ургамлын дээжээс өндөр чанарын нийт РНХ-г хурдан гаргаж авна.
ДНХ цэвэрлэх баганыг ашиглан RNase-гүй
Энгийн-бүх үйлдлүүд нь өрөөний температурт хийгддэг
Хурдан - 30 минутын дотор үйл ажиллагааг дуусгах боломжтой
Аюулгүй - органик урвалж ашиглаагүй 
Үзүүлэлтүүд
50 бэлтгэл, 200 бэлтгэл
Энэхүү хэрэгсэл нь полисахарид эсвэл полифенолын агууламж өндөртэй ургамлын янз бүрийн эд эсээс өндөр цэвэршилттэй, өндөр чанарын нийт РНХ-ийг үр дүнтэй гаргаж авах боломжтой Foregene-ийн боловсруулсан ээрэх багана болон томъёог ашигладаг.Энэ нь геномын ДНХ-ийг дээд давхарга болон эд эсийн лизатаас хялбархан арилгах боломжтой ДНХ-Цэвэрлэх баганаар хангадаг.Зөвхөн РНХ багана нь РНХ-г үр дүнтэй холбож чаддаг.Энэхүү хэрэгсэл нь олон тооны дээжийг нэгэн зэрэг боловсруулах боломжтой.
Бүхэл бүтэн систем нь RNase агуулаагүй тул цэвэршүүлсэн РНХ задрахгүй.Буфер PRW1 ба PRW2 буфер нь олж авсан РНХ нь уураг, ДНХ, ион, органик нэгдлээр бохирдохгүй байхыг баталгаажуулж чадна.
Иж бүрдэл хэсгүүд
| PSL1 буфер, PS буфер, PSL2 буфер |
| Буфер PRW1, буфер PRW2 |
| RNase-гүй ddH2O, ДНХ цэвэрлэх багана |
| Зөвхөн РНХ багана |
Онцлог, давуу тал
■ Өрөөний температурт (15-25 ℃) бүх процессын турш мөсөн банн, бага температурт центрифуггүйгээр ажиллана.
■ RNase-гүй иж бүрэн иж бүрдэл, РНХ-ийн задралын талаар санаа зовох шаардлагагүй.
■ Полисахарид ба полифенолын ургамлын дээжээс РНХ-ийг цэвэрлэхэд онцгой тохиромжтой.
■ ДНХ цэвэрлэх багана нь ДНХ-тэй тусгайлан холбогддог тул уг хэрэгсэл нь DNase нэмэлгүйгээр геномын ДНХ-ийн бохирдлыг арилгах боломжтой.
■ Өндөр РНХ-ийн гарц: Зөвхөн РНХ багана ба өвөрмөц томъёо нь РНХ-г үр дүнтэй цэвэршүүлдэг.
■ Хурдан хурд: ажиллахад хялбар, 30 минутын дотор дуусгах боломжтой.
■ Аюулгүй байдал: органик урвалж шаардлагагүй.
■ Өндөр чанар: Цэвэршүүлсэн РНХ-ийн хэлтэрхийнүүд нь өндөр цэвэршилттэй, уураг болон бусад хольцгүй бөгөөд туршилтын янз бүрийн хэрэглээг хангах боломжтой.
Бүтээгдэхүүний параметрүүд
■ Доод урсгалын хэрэглээ: эхний хэлхээний cDNA синтез, RT-PCR, молекул клонжуулалт, Northern Blot гэх мэт.
■ Дээж: Полисахарид ба полифенолын шинэ буюу хөлдөөсөн ургамлын эд
■ Тун: 50мг ургамлын эд
■ Цэвэршүүлэх баганын РНХ-ийг холбох хамгийн дээд хүчин чадал: 80 мкг
■ Уусмалын хэмжээ: 50-200 мкл
Иж бүрдэл програм
Энэ нь полисахарид ба полифенолын өндөр агууламжтай шинэхэн эсвэл хөлдөөсөн ургамлын эд эсийн дээжээс (ялангуяа шинэхэн ургамлын навчны эдээс) нийт РНХ-ийг гаргаж авах, цэвэршүүлэхэд тохиромжтой.
Ажлын урсгал
Диаграм
Plant Total RNA Isolation Kit Plus нь полисахарид ба полифенолын 50 мг шинэхэн навчийг боловсруулж, 5% цэвэршүүлсэн РНХ-ийг электрофорезоор туршсан.
1: Банана
2: Гинкго
3: Хөвөн
4: Анар
Хадгалалт ба Хадгалах хугацаа
Энэ иж бүрдлийг тасалгааны температурт (15-25 ℃) хуурай нөхцөлд 24 сар хадгалах боломжтой;Хэрэв удаан хугацаагаар хадгалах шаардлагатай бол 2–8℃ хэмд хадгалах боломжтой.
PSL1 буферийг β-меркаптоэтанол нэмснээс хойш 1 сарын турш 4℃ температурт байрлуулж болно (туршилтын нэгэн зэрэг нэмэхийг зөвлөж байна).
Багана бөглөрөв
Багана залгагдсаны дараа РНХ-ийн гарц багасч, РНХ-ийг цэвэрлэх боломжгүй болж, олж авсан РНХ-ийн масс бага байна.
Нийтлэг шалтгааны шинжилгээ:
1. Түүврийн завсарлага нь нарийн биш юм.
Дээжний эвдрэл нь ДНХ-ЦЭВЭРЛЭХ баганыг бүрэн бөглөрөхөд хүргэдэггүй, харин РНХ-ийн гарц, чанарт нөлөөлдөг.Дээжийг хугалах үед хангалттай шингэн азотоор хурдан нунтаглах ажиллагааг зөвлөж байна, дээжийн эсийн хана, эсийн мембран болон бусад эдийг бутлахыг хичээ.Полиол полисахаридын ургамлын дээжийн хувьд бид ургамлын нийт РНХ-ийн тусгаарлах иж бүрдлийг ашиглахыг зөвлөж байна.
2. ДНХ-цэвэрлэх баганаар тусгаарлагдсан дээжийн дээд давхаргыг сорох үед эсийн хуваагдсан тунадас амьсгалж болно.
Авсан эсийн хуваагдсан хурдас нь РНХ шингээх үйлдлийг гүйцэтгэх үед ГАНЦХАН РНХ-ийн багана үүсэхэд хүргэдэг (6-р алхамыг үзнэ үү).Эсийн үлдэгдэл сорохоос зайлсхийхийн тулд энэ хэт шингэнийг сорохдоо болгоомжтой байхыг зөвлөж байна.
3. Дээжийн анхны хэмжээ хэт их байна.
Дээжийг хэтрүүлэн хэрэглэснээр дээжийн бүрэн бус хуваагдал эсвэл PSL1 буферээр эсийн бүрэн задралд хүргэж, цэвэршүүлэх явцад цэвэршүүлэх багана бөглөрнө.Ургамлын нийт РНХ тусгаарлах иж бүрдэл Цэвэршүүлсэн дээж тус бүр 50 мг байна.Полиол полисахаридын ургамлын дээжийн хувьд бид ургамлын нийт РНХ-ийн тусгаарлах иж бүрдэл PLUS-ийг туршиж үзэхийг зөвлөж байна.
4. Центрифугийн температур хэт бага байна.
РНХ-ийг тусгаарлах, цэвэршүүлэх процессыг бүхэлд нь өрөөний температурт (20-25°C), дээжийн эдийг шингэн азотоор хугалахаас бусад тохиолдолд. Зарим криоген центрифугуудын температур 20 хэмээс бага байна.℃, энэ нь ДНХ цэвэрлэх багана ба/эсвэл зөвхөн РНХ багана бөглөрөхөд хүргэж болзошгүй.Хэрэв ийм зүйл тохиолдвол центрифугийн температурыг 20-25 болгож тохируулна уу℃, бализис хольц ба/эсвэл этанол нэмсэн супернатантыг 37 хэм хүртэл халаасан эсэхийг шалгана уу.°C.
Ямар ч РНХ гаргаж аваагүй эсвэл РНХ-ийн гарц бага байна
Сэргээх үр ашигт ихэвчлэн олон хүчин зүйл нөлөөлдөг, тухайлбал: дээжийн РНХ-ийн агууламж, үйл ажиллагааны арга, шингэний хэмжээ гэх мэт.
Дараах нийтлэг шалтгаануудын шинжилгээ:
1. Үйл ажиллагааны явцад мөсөн банн эсвэл бага температурт (4 ° C) центрифуг хийсэн.
Зөвлөмж: Өрөөний температурт ажиллуулна уу (15-25°C) бүх процесст мөс банн, бага температурт центрифуг хийхгүй.
2. Дээжийг буруу хадгалснаас эсвэл дээжийг удаан хугацаагаар хадгалснаас болж РНХ задарсан.
Зөвлөмж: Шинээр цуглуулсан дээжийг шингэн азотоор хурдан хөлдөөж, дараа нь -80 хэмд удаан хугацаагаар хадгалах, дээжийг дахин хөлдөөх, гэсгээхээс зайлсхийх;эсвэл дээжийг РНХ тогтворжуулагчийн RNA дараачийн уусмалд (амьтны дээж) нэн даруй дэвтээнэ.
3.Дээжний хуваагдал, задрал хангалтгүй байгаа нь цэвэршүүлэх баганыг бөглөрөхөд хүргэдэг.
Зөвлөмж: Эдийг нунтаглахдаа эдийг хангалттай нунтаглаж, урьдчилан бэлтгэсэн PSL1 буфер руу хурдан шилжүүлнэ үү (зөв β-ME-ийн хувь нэмсэн эсэхийг баталгаажуулна уу, процедурын 1-р алхамыг үзнэ үү).
4.Улгагчийг буруу нэмсэн.
Зөвлөмж: RNase-Free ddH2O нь цэвэршүүлэх баганын мембраны голд дусааж байгаа эсэхийг шалгаарай.
5. PSL2 Buffer эсвэл Buffer PRW2-д үнэмлэхүй этилийн спиртийн зөв хэмжээг нэмээгүй.
Зөвлөмж: Зааврыг дагаж, иж бүрдлийг хэрэглэхийн өмнө PSL2 болон Buffer PRW2-д үнэмлэхүй этилийн спиртийн хэмжээг зөв нэмээд сайтар холино уу.
6.Эдийн дээжийн хэмжээ тохиромжгүй байна.
Зөвлөмж: Buffer PSL1-ийн 500 мкл тутамд 50 мг эд хэрэглэнэ.Хэт их эдийг ашиглах нь гаргаж авсан РНХ-ийн хэмжээг бууруулж, үүссэн РНХ-ийн цэвэршилтийг мөн бууруулна.Дээжний анхны тунг РНХ олборлох үйл ажиллагаа бүрт 50 мг-аас хэтрэхгүй байхыг бид хатуу зөвлөж байна.
7. Тохиромжгүй шүүрэлтийн хэмжээ эсвэл бүрэн бус шүүрэл.
Зөвлөмж: Цэвэршүүлэх баганын элюентийн хэмжээ 50-200 мкл;хэрэв шүүрлийн нөлөө хангалтгүй бол урьдчилан халаасан RNase-Free ddH2O нэмсний дараа тасалгааны температурт хугацааг сунгахыг зөвлөж байна, тухайлбал 5-10мин.
8. Цэвэршүүлэх баганад BufferPRW2-ээр угаасны дараа этанолын үлдэгдэл байна.
Зөвлөмж: Хэрэв хоосон хоолойг 1 минутын турш центрифуг хийж, PRW2 буферт угаасны дараа этанол үлдвэл та хоосон хоолойг центрифуг хийх хугацааг 2 минут хүртэл нэмэгдүүлэх эсвэл этанолын үлдэгдлийг бүрэн арилгахын тулд цэвэршүүлэх баганыг тасалгааны температурт 5 минутын турш байрлуулж болно.
9. Иж бүрдлийг буруу ашигласан.
Зөвлөмж: Полифенол полисахаридын ургамлын дээжийн хувьд Ургамлын нийт РНХ тусгаарлах хэрэгсэл гэх мэт нийтлэг иж бүрдлийг ашиглах нь хамгийн тохиромжтой РНХ дээж авах боломжгүй байж магадгүй юм.Полифенол полисахаридын ургамлын дээжинд тусгайлан зориулсан Plant Total RNA IsolationKit Plus-ийг ашиглахыг танд зөвлөж байна.Полифенол ба полисахаридын ургамлын дээжээс РНХ гаргаж авахад зориулж тусгайлан боловсруулсан иж бүрдэл.
OD260/OD280 утга бага байна
РНХ-г ddH2O-ээр ялгаж, спектрофотометрийн уншилтанд ашигласан нь OD260/OD280-ийн бага утгыг үүсгэдэг.Харьцангуй зөв OD260/OD280 утгыг авахын тулд 10 мМ Tris-HCl, рН 7.5 (РНазгүй ddH2O гэхээсээ илүү) ашиглахыг зөвлөж байна, 19-р хуудасны “РНХ-ийн концентраци ба цэвэршүүлэх шинжилгээ”-г үзнэ үү.
Цэвэршүүлсэн РНХ нь доройтдог
Цэвэршүүлсэн РНХ-ийн чанар нь дээжийг хадгалах, RNase-ийн бохирдол, манипуляци зэрэг хүчин зүйлүүдтэй холбоотой байдаг.
Нийтлэг шалтгаануудын шинжилгээ:
1. Эдийн дээжийг цуглуулсны дараа хугацаанд нь хадгалаагүй.
Зөвлөмж: Хэрэв эд эсийн дээжийг цуглуулсны дараа цаг тухайд нь ашиглаагүй бол нэн даруй шингэн азотод бага температурт хадгалах эсвэл шингэн азотод хурдан хөлдөөсний дараа -80 хэмд удаан хугацаагаар хадгалах эсвэл дээжийг РНХ тогтворжуулагчийн RNA дараачийн уусмалд (амьтны дээж) нэн даруй дүрнэ үү.РНХ гаргаж авахын тулд шинээр цуглуулсан эд эсийн дээжийг ашиглахыг хичээ.
2.Эдийн дээжийг олон удаа хөлдөөх, гэсгээх.
Зөвлөмж: Эдийн дээжийг хадгалахдаа жижиг хэсэг болгон хувааж, хадгалахдаа хэсэгчлэн гаргаж авах нь дээжийг олон удаа хөлдөөх, гэсгээх үед РНХ задрахаас сэргийлнэ.
3.RNase-ийг хагалгааны өрөөнд нэвтрүүлсэн эсвэл нэг удаагийн бээлий, маск гэх мэтийг өмсөөгүй.
Зөвлөмж: РНХ-ийн задралын туршилтыг тус тусад нь РНХ-ийн үйл ажиллагаанд хамгийн сайн хийдэг бөгөөд туршилтын өмнө лабораторийн ширээг цэвэрлэж, RNase-ийг нэвтрүүлснээр РНХ-ийн доройтлоос зайлсхийхийн тулд туршилтын явцад нэг удаагийн бээлий, амны хаалт зүүх хэрэгтэй.
4. Ашиглалтын явцад урвалж RNase-ээр бохирдсон байна.
Зөвлөмж: Холбогдох туршилтуудад зориулж ургамлын нийт РНХ олборлох иж бүрдлийг шинэ цувралаар солино уу.
5.РНХ-г боловсруулахад ашигладаг центрифугийн хоолой болон пипеткийн үзүүрүүд RNase-ээр бохирдсон байна.
Зөвлөмж: РНХ задлахад ашигласан центрифугийн хоолой, пипеткийн үзүүр, пипетк зэрэг нь бүгд RNase-гүй эсэхийг шалгаарай.
Зааварчилгааны гарын авлага:
Ургамлын нийт РНХ тусгаарлах хэрэгсэл Plus зааварчилгаа
