Бид туршлагатай үйлдвэрлэгч байсан.БНХАУ-ын өндөр мэдрэмжтэй нэг шаттай датчик Rt-д зориулсан томоохон хөнгөлөлтийн зах зээлд дийлэнх хувийг авсан.QpcrV2 иж бүрдэл, Чанар бол үйлдвэрийн амьдрал, Хэрэглэгчийн эрэлт хэрэгцээнд анхаарлаа төвлөрүүлэх нь компанийн оршин тогтнох, хөгжлийн эх үүсвэр юм. Бид үнэнч шударга, сайн санааны ажлын байр суурийг баримталж, таныг ирэхийг тэсэн ядан хүлээж байна!
Бид туршлагатай үйлдвэрлэгч байсан.Зах зээлийнхээ нэн чухал гэрчилгээг авахад дийлэнх хувийг эзэлдэгХятадын Так ДНХ Полимераз, Qpcr, Манай компани боломжийн үнэ, үйлдвэрлэлийн богино хугацаа, борлуулалтын дараах сэтгэл ханамжтай үйлчилгээг амлаж байна, бид таныг хүссэн үедээ манай үйлдвэрт зочлохыг урьж байна.Одоо бид хамтдаа сайхан, урт хугацааны бизнестэй байхыг хүсэн ерөөе!!!

Тодорхойлолт

Энэхүү иж бүрдэл нь RT-qPCR урвалд зориулж өсгөвөрлөсөн эсийн дээжээс РНХ-ийг хурдан гаргаж чаддаг өвөрмөц лизисын буфер системийг ашигладаг бөгөөд ингэснээр цаг хугацаа шаардсан, хөдөлмөр их шаарддаг РНХ цэвэршүүлэх процессыг арилгадаг.РНХ-ийн загварыг ердөө 7 минутын дотор авах боломжтой.Иж бүрдэлд нийлүүлсэн 5×Direct RT Mix болон 2×Direct qPCR Mix-SYBR урвалжууд нь ПГУ-ын бодит цагийн тоон үр дүнг хурдан бөгөөд үр дүнтэй авах боломжтой.

5×Direct RT Mix ба 2×Direct qPCR Mix-SYBR нь дарангуйлагчийг тэсвэрлэх чадвартай бөгөөд дээжийн лизатыг шууд RT-qPCR-д загвар болгон ашиглаж болно.Энэхүү иж бүрдэл нь өвөрмөц РНХ-ийн өндөр хамааралтай Foregene урвуу транскриптаза, халуун D-Taq ДНХ полимераз, dNTPs, MgCl агуулдаг.₂, урвалын буфер, ПГУ-ын оновчтой, тогтворжуулагч.

Үзүүлэлтүүд

200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns

Иж бүрдэл хэсгүүд

Онцлог, давуу тал

■ Энгийн бөгөөд үр дүнтэй: Cell Direct RT технологийн тусламжтайгаар РНХ-ийн дээжийг ердөө 7 минутын дотор авах боломжтой.

■ Түүврийн эрэлт бага, 10 хүртэлх нүдийг турших боломжтой.

■ Өндөр нэвтрүүлэх чадвар: 384, 96, 24, 12, 6 цооногийн ялтсуудад өсгөвөрлөсөн эсүүдийн РНХ-ийг хурдан илрүүлдэг.

■ ДНХ баллуур нь суллагдсан геномыг хурдан устгаж, дараагийн туршилтын үр дүнд үзүүлэх нөлөөллийг эрс багасгадаг.

■ Оновчтой RT ба qPCR систем нь хоёр үе шаттай RT-PCR урвуу транскрипцийг илүү үр дүнтэй, ПГУ-ыг илүү тодорхой болгож, RT-qPCR урвалын дарангуйлагчдад илүү тэсвэртэй болгодог.

Иж бүрдэл програм

Хэрэглэх хүрээ: өсгөвөрлөсөн эсүүд.

- Дээж задралаар ялгарсан РНХ: зөвхөн энэ багцын RT-qPCR загварт хамаарна.

- Энэхүү иж бүрдлийг дараах зорилгоор ашиглаж болно: генийн экспрессийн шинжилгээ, siRNA-аар дамжсан генийг намжаах нөлөөг шалгах, эмийн скрининг гэх мэт.

Диаграм

Хадгалалт ба Хадгалах хугацаа

Энэ багцын I хэсгийг 4℃ хэмд хадгалах ёстой;II хэсгийг -20 хэмд хадгална.

Foregene Protease Plus II-ийг 4 хэмд, -20 хэмд хөлдөөж болохгүй.

Урвалж 2×Direct qPCR Mix-SYBR-ийг -20℃ температурт харанхуйд хадгална;Хэрэв байнга хэрэглэдэг бол 4℃ хэмд богино хугацаанд хадгалах боломжтой (10 хоногийн дотор ашиглах). Бид туршлагатай үйлдвэрлэгч байсан.Wining the majority in crucial certifications of its market for Big discounting China High Sensitivity One-Step Probe Rt-Qpcr Kit V2, Quality is factory' life , Focus on customer' request is the source of the company survival and development, We acious to can be benesty and good effort working attitude, waiting to eat your coming !
Том хямдралХятадын Так ДНХ Полимераз, Qpcr, Манай компани боломжийн үнэ, үйлдвэрлэлийн богино хугацаа, борлуулалтын дараах сэтгэл ханамжтай үйлчилгээг амлаж байна, бид таныг хүссэн үедээ манай үйлдвэрт зочлохыг урьж байна.Одоо бид хамтдаа сайхан, урт хугацааны бизнестэй байхыг хүсэн ерөөе!!!

QuickEasyTM Cell Direct RT-qПГУ Kit -Taqman

Cat.No.DRT-01021/01022

≤ 1000,000 эсийг ашиглан шууд RT-qPCR-ийн хувьд

Бүтээгдэхүүний танилцуулга

Энэхүү бүтээгдэхүүн нь өвөрмөц лизисын буфер системийг ашиглан өсгөвөрлөсөн эсийн дээжээс RT-qPCR урвалд зориулж РНХ-ийг хурдан ялгаруулж, цаг хугацаа шаардсан, хөдөлмөр их шаарддаг РНХ цэвэршүүлэх процессыг арилгадаг бөгөөд шаардлагатай РНХ загварыг олж авахад ердөө 7 минут зарцуулдаг. 5 × Шууд RT Mix, 2 × Шууд qPCR Mix-Taqman-ийн тусламжтайгаар PCR-ээр хурдан шуурхай, үр дүнтэй үр дүнд хүрдэг.

5× Шууд RT Mix ба 2× Шууд qPCR Mix-Taqman нь дарангуйлагчийг тэсвэрлэх чадвартай бөгөөд загвар болгон хэмжих дээжийн лизатыг ашиглан урвуу болон тусгай өсгөлтийг үр дүнтэй хийж чадна.Урвалж нь Foregene Reverse Transscriptase, Hot D-Taq DNA Polimerase, dNTPs, MgCl агуулдаг.₂, Reaction Buffer, PCR Optimizer, Stabilizer зэрэг нь дээжийг хурдан, хялбар илрүүлэхийн тулд задралын буфертэй хамт хэрэглэх боломжтой, өндөр мэдрэмж, өвөрмөц, тогтвортой байдлын шинж чанартай.

Бүтээгдэхүүний онцлог

Энгийн, үр дүнтэй Cell Direct RT технологи нь РНХ-ийн дээж авахад 7 минут зарцуулдаг.

Дээжний шаардлага бага бөгөөд туршилт хийхэд хамгийн багадаа 10 өсгөвөрлөсөн эсийг ашиглаж болно.

384, 96, 24, 12, 6 худагтай ялтсууд зэрэг өсгөвөрлөсөн эсийг РНХ-ийг хурдан шуурхай авах өндөр хүчин чадалтай.

DNA Eraser нь суллагдсан геномыг хурдан арилгах чадвартай бөгөөд дараагийн туршилтын үр дүнд үзүүлэх нөлөөллийг эрс багасгадаг.

Оновчтой RT ба qPCR системүүд нь урвуу транскрипц, өвөрмөц чанар, RT-qPCR урвалын дарангуйлагчийг тэсвэрлэх чадвар бүхий хоёр шатлалт RT-PCR-ийг идэвхжүүлдэг.

Иж бүрдэл програм

Хэрэглэх хүрээ: Өсгөвөрлөсөн эсүүд.

Дээжийн задралыг тайлбарласан РНХ: зөвхөн хоёр үе шаттай RT-qPCR загвар болгон ашигладаг.

Иж бүрдлийг дараах зорилгоор ашиглаж болно: генийн зохицуулалтын илэрхийлэлийн шинжилгээ, аллелийн шинжилгээ, эмийн скрининг гэх мэт.

Багцын хязгаарлалт

Олшруулсан фрагментууд ≤ 300 bp.

Иж бүрдэл нь эсийг шинээр өсгөвөрлөхөд ашигладаг.

Бүтээгдэхүүний чанарын хяналт

FOREGENE-ийн Чанарын Нийт Удирдлагын Системийн дагуу Cell Direct RT-qPCR цуврал иж бүрдэл бүрийг багц бүрийн чанарын найдвартай, тогтвортой байдлыг хангахын тулд хэд хэдэн удаа хатуу шалгадаг.

Багцын агуулга

*:Cell Lysis, 5×Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman-ийг тусад нь худалдан авч болно, дэлгэрэнгүй мэдээллийг Хавсралт 1 (PAGE 13)-д өгсөн болно.

Хадгалах нөхцөл

1. Хүргэлтийн нөхцөл

Бага температурт мөсөн савны хайрцаг тээвэрлэх бүх үйл явц нь иж бүрдэл нь <4 °C төлөвт байгаа эсэхийг баталгаажуулах.

2. Хадгалах нөхцөл

I хэсгийг 4°С, II хэсгийг -20°С хэмд хадгална.

Foregene Protease Plus II-ийг -20 хэмд хөлдөөхгүй, 4 хэмд хадгална.

Урвалж 2× Шууд qPCR Mix-Taqman-ыг -20°C-т, эсвэл байнга хэрэглэдэг бол (10 хоногийн дотор) богино хугацааны хэрэглээнд зориулж 4°C-т хадгална.

Багцын бүрэлдэхүүн хэсгийн мэдээлэл

Буфер CL: Эсийн задралын урвалд шаардлагатай орчинг бүрдүүлнэ.

Буфер ST: Дараагийн RT-д үзүүлэх нөлөөллөөс зайлсхийхийн тулд лизат дахь идэвхтэй бодисыг зогсооно.

ДНХ баллуур: ДНХ арилгагч, дараагийн туршилтуудад геномыг арилгах нөлөө.

5× Шууд RT холимог: РНХ-ийн өндөр хамаарал бүхий Foregene урвуу транскриптаза, RNase дарангуйлагч, dNTPs, тогтворжуулагч, сайжруулагч, оновчтой болгогч, урвуу транскрипцийн праймерыг оновчтой уялдуулна (Random Primer, Oligo(dT))₁₈Праймер).

Foregene Protease Plus II: Лизисийн буферийн хүрээнд эсүүд задран нуклейн хүчлийг ялгаруулдаг.

2× Шууд qPCR Mix-Takman: Энэхүү урвалж нь халуун D-Taq ДНХ полимераз, dNTPs, MgCl агуулдаг.₂, урвалын буфер, ПГУ-ын оновчтой болгох, тогтворжуулагч.

20× ROX лавлагаа будаг: ABI, Stratagene болон бусад компаниудын бодит цагийн ПГУ-ын олшруулалтын хэрэгсэлд ихэвчлэн ашиглагддаг бөгөөд ПГУ-ын тунгийн алдаанаас үүссэн ПГУ-ын хоолой болон хоолойны ялгааг тохируулахад ашигладаг.Янз бүрийн хэрэгсэлд шаардагдах 20× ROX Reference Dye концентраци өөр өөр байдаг бөгөөд хэрэглэгч үүнийг багажийн санал болгосон концентрацийн дагуу нэмж болно.

RNase-гүй ddH₂O: Хоёр үе шаттай RT-qPCR урвалд зориулсан RNase агуулаагүй ариутгасан хэт цэвэр ус.

Урьдчилан сэргийлэх:(Багцыг ашиглахаасаа өмнө урьдчилан сэргийлэх арга хэмжээг анхааралтай уншина уу)

Дээж хоорондын бохирдлоос зайлсхийхийн тулд туршилтын ажиллагааны аргад анхаарлаа хандуулаарай.

RNase-ийн бохирдол, РНХ-ийн задралаас зайлсхийхийн тулд туршилтын орчин, багаж хэрэгслийн цэвэр байдалд анхаарлаа хандуулаарай.

Шинэ эсвэл сайн хадгалагдсан эсийн дээж авч, хөлдөөж гэсгээсэн эсийн дээжийг хэзээ ч бүү ашигла.

5× Шууд qPCR Mix, 2× Шууд qPCR Mix-Taqman нь дахин хөлдөөх-гэсэхээс зайлсхийх ёстой, эс тэгвээс энэ нь урвуу транскрипц болон ПГУ-ын үр ашигт нөлөөлнө.

Бэлтгэлхоолны дэглэмөмнөүйл ажиллагаа

Энэ иж бүрдлийг ашиглахаасаа өмнө зааврыг анхааралтай уншина уу.Cell Direct RT-qPCR иж бүрдэл нь энгийн, тохиромжтой, ажиллахад хурдан бөгөөд заавар нь бүхэл бүтэн иж бүрдэл болон хэрхэн зөв ашиглах талаар бүрэн мэдээллийг агуулдаг.Хэрэглэхийн өмнө шаардлагатай туршилтын материал, тоног төхөөрөмжийг бэлтгэнэ үү.

Туршилтын материал, тоног төхөөрөмж

◆ Соёлын эсүүд.

◆ 1.5 мл эсвэл 2 мл, RNase-/DNase-гүй центрифугийн хоолой, RNase-/DNase-гүй үзүүр, 0.2 мл ариутгасан qPCR хоолой.

◆ qPCR машин, пипетк, ширээний центрифуг (≥13,400×g) (туршилтын хэрэгцээ шаардлагаас хамааран) гэх мэт.

Аюулгүй байдал

◆ Энэхүү бүтээгдэхүүн нь зөвхөн шинжлэх ухааны судалгаанд зориулагдсан тул эм, эмнэлзүйн, хоол хүнс, гоо сайхны зориулалтаар ашиглахыг хориглоно.

◆ Химийн бодис хэрэглэхдээ лабораторийн хувцас, бээлий, хамгаалалтын шил зэргийг өмс.

Үйл ажиллагаахөтөч

Cell Lysis систем, RT систем, qPCR урвалын уусмалын нэмэлт багцуудыг Хавсралт 1-ээс (PAGE 13) тусад нь худалдан авч болно.

Үйлдлийн гарын авлага

Х: Дээжийн РНХ ялгаруулалт

1. Эсийг урьдчилан боловсруулсан: Эсийн өсгөвөрлөх хавтанг хүйтэн PBS-ээр угааж, дараа нь эсийг задлана (10-10)⁶), 10⁶ эсийн хэмжээнээс илүү байвал РНХ ялган авах, цэвэршүүлэхийн тулд Эсийг РНХ тусгаарлах иж бүрдэл (DE-03111) эсвэл Амьтны нийт РНХ тусгаарлах иж бүрдэл (DE-03011)-ийг гаргаж авахыг зөвлөж байна.

1.1.Наалдсан эсүүд (жишээ нь 24 худгийн хавтан)

1.1.1.Худаг тус бүрийн эсийн тоог тодорхойлж, эсийн тоо 1 × 10 гэдгийг тодорхойлно⁵, мөн пипеткээр өсгөвөрлөх савнаас өсгөвөрлөгчийг зайлуулна.

1.1.2.Худаг бүрт 200 мкл урьдчилан хөргөсөн 1 × PBS нэмнэ.Дахин дахин соруулж болохгүй ба PBS-ийг худгаас зайлуулна.Хавтанг хазайлгаж, аль болох их хэмжээний PBS-ийг арилгана.2-р алхам руу үргэлжлүүлнэ үү.

1.1.3.Өөр өөр эсийн өсгөвөрлөх таваг эсвэл эсийн өсгөвөрлөх таваг дахь лавлагааны дугаар 1-1 хүснэгтэд эсийг угаах зорилгоор урьдчилан хөргөсөн 1 × PBS нэмсэн.

Хүснэгт 1-1: Өөр өөр тооны эсийн PBS-ийн тун

Анхаарна уу:Бат бөх наалдсан эсийг баталгаажуулах,угаах үед их хэмжээний эсийн алдагдлаас сэргийлнэ.

1.2.Суспензийн эсүүд эсвэл сүвэрхэг бус хавтангаар өсгөвөрлөсөн наалдсан эсүүд

1.2.1.Олон худгийн бус ялтсанд өсгөвөрлөсөн наалдсан эсүүд (суспензийн эсүүд дараагийн алхам 1.2.2-оос эхэлнэ), эсийг ердийн эс цуглуулах аргын дагуу цуглуулж, салгаж, өсгөвөрлөх хавтан эсвэл центрифугийн хоолойд хийнэ;Хэрэв трипсинжуулалтыг ашиглаж байгаа бол эсийг цуглуулж, үлдэгдэл трипсиныг арилгахын тулд центрифуг хийх шаардлагатай бөгөөд эсийг тараахын тулд PBS дахин түдгэлзүүлсэн эсүүдийг тус тусад нь нэмж оруулав.

1.2.2.Тооцоолсон эсийн тоог гаргасны дараа 1х10 нүдийг хуваана⁵ нэгийг нь хуруу шилэнд центрифуг хийж, 1000хг-т 10 минутын турш центрифуг хийж эсийг цуглуулна.

1.2.3.Центрифугийн хоолойд 200 мкл PBS нэмж, дахин дахин соруулж болохгүй, PBS-ийг шууд соруулна.2-р алхам руу шилжинэ. (Хэрэв тунадасжуулахад хэцүү бөгөөд эсийг дахин түдгэлзүүлсэн бол дээд давхаргыг хаяснаас хойш 10 минутын дараа 1000хг центрифуг хийж болно, эсийн үрлийг 2-р алхам руу шилжүүлнэ)

2.Эсийн задрал: Дараах хүснэгт 1-2-ын бэлтгэсэн задралын системийн дагуу өрөөний температурт тэнцвэржүүлсэн буфер CL, DNA Eraser болон Foregene Protease Plus II-ийг зайлуулна: (Лизис уусмалыг хэрэглэхэд бэлэн).

Хүснэгт 1-2: хуваагдал системийн бэлтгэл (Жич: мөсөн дээрх бэлтгэлд)

3.(Жишээ нь 24 цооногийн хавтан) Цооног бүрт 200 мкл эсийн задралын мастер хольцыг соруулж, 5-10 удаа дахин үлээж, өрөөний температурт (20-25 ℃) 5 минутын турш өсгөвөрлөнө.

Анхаарна уу:Бөмбөлөг үүсэхээс зайлсхийхийн тулд пипеткийн хэмжээсийг 200 мкл ба түүнээс бага хэмжээнд тохируулна уу.Лизисийн дараа эсүүд үүлэрхэг мэт харагдах бөгөөд энэ нь хэвийн үзэгдэл юм.

4. (Жишээ нь 24 худгийн хавтан) шингэнд 20 мкл буфер ST (өөр өөр задралын систем ST Buffer ST-ийг 1-3-р хүснэгтэд үзүүлсэн хэмжээгээр нэмсэн) нэмж, 5-10 удаа дахин соруулж, өрөөний температурт (20-25 ℃) 2 минутын турш өсгөвөрлөнө.

Анхаарна уу:Пипеткийн үзүүрийг гадаргуугийн доор байрлуулж, лизат нэмсэн эсэхийг баталгаажуулна,бөмбөлөг үүсэхээс зайлсхийхийн тулд пипеткийн хэмжээсийг 200 мкл ба түүнээс бага болгож тохируулна уу.

Хүснэгт 1-3:ST Buffer нэмнэ үү

5. Лизатыг дараагийн RT-qPCR туршилтуудад хэрэглэнэ.Хэрэв дараагийн туршилтыг хугацаанд нь хийх боломжгүй бол мөсөн дээр 2 цагаас илүүгүй байлгаж, -20 ℃ эсвэл -80 ℃ (гурван сараас илүүгүй) хэмд хадгална.

Б: RT системийн бэлтгэл

1.5 × Direct RT Mix-ийг гаргаж аваад мөсөн ванн дээр тавиад, байгалийн жамаар хайлуулж, дараа нь хэрэглэхийн тулд зөөлөн холино;RNase-Free ddH2O-г гаргаж аваад хайлуулж, дараа нь ашиглахын тулд мөсөн ваннд байрлуулна.Хүснэгт 2-1-ийн дагуу мөсөн дээрх урвалын системийг бэлтгэ.

Хүснэгт 2-1: RT урвалын системийг бэлтгэх

2. Системийг боловсруулж дууссаны дараа зөөлөн хольж, дараах хүснэгт 2-2 урвалын нөхцөлд RT урвалд богино хугацаанд центрифуг хийнэ.

Хүснэгт 2-2: RT урвалын нөхцөлийн тохиргоо

3. Урвал дууссаны дараа урвалын бүтээгдэхүүнийг qPCR-д зориулж мөсөн дээр шууд байрлуулсан тул -20 ℃ эсвэл -80 ℃ урт хугацаанд хадгална уу.

Тайлбар: Цэвэршүүлээгүй загвар ашигласан тул урвуу транскрипцийн бүтээгдэхүүнд цагаан тунадас гарч болзошгүй.Энэ бол хэвийн үзэгдэл.Дараагийн туршилтыг хийхийн тулд дээд давхаргыг нэн даруй центрифуг хийнэ.

Үүссэн RT урвалын уусмалыг дараагийн алхамын бодит цагийн ПГУ-ын урвалын системд нэмж, урвалын системийн 10-30% -ийн хооронд нэмэхийг зөвлөж байна.

C: qPCR урвалын системийн бэлтгэл

1. Урвалын системийг бэлтгэхийн тулд дараах хүснэгт 3-1-ийн дагуу шаталсан cDNA загварт B-ийн зохих хэмжээг бэлтгэнэ.

Тайлбар: cDNA загварын хэмжээ нь qPCR системийн 10-30%-ийг эзэлдэг.Жишээлбэл, 20μl qPCR системд 2-6 мкл лизис буфер нэмнэ, гэхдээ 6 мкл-ээс ихгүй байна.

2. qPCR урвалын оновчлолын сайн qPCR нөхцлүүд (Аннеалийн температур, г.м.) (Хүснэгт 3-2-т өгсөн урвалын нөхцөл).

Тайлбар: Илүү сайн үр дүнд хүрэхийн тулд qPCR урвалын оновчтой нөхцлийг ашиглахыг хичээ.

Хүснэгт 3-1: ПГУ-ын урвалын системийг бэлтгэх

1*: Праймерын урвалын гүйцэтгэл муу үед праймерын концентрацийг 50-900 нМ-ийн хооронд тохируулж болно.

Тайлбар: qPCR системийг туршилтын хэрэгцээ болон флюресцент циклийн загварт тохируулан тохируулж болно.50 дахь qPCR-ийн хувьдμl системийн хувьд урвалжийн тунг 20-ийн дагуу пропорциональ тохируулнаμл систем.

2*: Флюресценцийн тоон дулааны циклийн дагуу ROX Reference Dye-ийн тохирох эцсийн концентрацийг сонгоно.Нийтлэг флюресценцийн тоон циклд зориулсан ROX лавлагаа будгийн хамгийн тохиромжтой концентрацийг доорх хүснэгтэд үзүүлэв.

Хүснэгт 3-2: qPCR урвалын нөхцөлийг үзүүлэв

Тайлбар: Хамгийн сайн qPCR үр нөлөөг авахын тулд градиент ПГУ-ыг ашиглан янз бүрийн загварууд болон өөр өөр праймеруудын урвалын нөхцлийг оновчтой болгож болно.ПГУ-ын урвалын нөхцөл нь флюресценцийн анализатор, загвар, праймер гэх мэт зэргээс шалтгаална. Тодорхой үйл ажиллагаанд флюресценцийн тоон дулааны циклер, загварын төрөл, сонирхож буй фрагментийн хэмжээ, олшруулсан фрагментийн үндсэн дараалал, GC агууламж, урвалын температурын хугацаа, урвалын праймерын үргэлжлэх хугацаа, зэрэгт тохируулан оновчтой урвалын нөхцлийг төлөвлөх шаардлагатай.

Бодит цагийн ПГУ-ын праймерын дизайны зарчим

Урагшаа праймер ба урвуу праймер

Бодит цагийн ПГУ-ын хувьд праймер дизайн маш чухал юм.Праймерууд нь ПГУ-ын олшруулалтын өвөрмөц байдал, үр дүнтэй холбоотой бөгөөд дараах зарчмуудыг үндэслэн боловсруулж болно.

◆ Праймерын урт: 18-30bp.

◆ GC агууламж: 40-60%.

◆ Tm утга: Primer 5 гэх мэт праймер дизайны програм хангамж нь праймерын Tm утгыг өгч чадна.Урсгалын дээд ба доод талын праймеруудын Tm утгууд аль болох ойр байх ёстой.Tm-ийн тооцооллын томъёог мөн ашиглаж болно: Tm = 4 ° C (G + C) + 2 ° C (A + T).ПГУ-ыг хийхдээ праймерын Tm-ээс доош температурыг 5 ° C-аас бага температурыг ерөнхийд нь зөөлрүүлэх температур гэж сонгоно (засварлах температурын харгалзах өсөлт нь ПГУ-ын урвалын өвөрмөц байдлыг нэмэгдүүлдэг).

◆ Праймер ба ПГУ-ын бүтээгдэхүүн:

◆ Дизайн праймер ПГУ-ын олшруулалтын бүтээгдэхүүний урт нь 100-150bp байвал зохимжтой.

◆ Загварын хоёрдогч бүтцийн хэсэгт дизайны праймераас аль болох зайлсхийх хэрэгтэй.

◆ Урсгалын дээд ба доод талын праймеруудын 3′ төгсгөлийн хооронд 2 ба түүнээс дээш нэмэлт суурь үүсэхээс зайлсхий.

◆ Primer 3′ терминалын суурь нь нэмэлт 3 дараалсан G эсвэл C-тэй байж болохгүй.

◆ Праймерууд өөрсдөө нэмэлт бүтэцтэй байж болохгүй, эс тэгвээс үсний хавчаар бүтэц үүсч, ПГУ-ын олшруулалтад нөлөөлнө.

◆ ATCG-ийг праймерын дарааллаар аль болох жигд тарааж, 3′ терминалын суурийг T гэж үзэхээс зайлсхийх хэрэгтэй.

Хавсралт1:CшуудRT-qPCR Бүрэлдэхүүн хэсэгt нэмэлт багц

1. Эсийн задралын уусмал