Хөхний арчдас/FTA карт ДНХ тусгаарлах иж бүрдэл Хөхний арчдасаас геномын ДНХ ялгах буюу цэвэршүүлэх хэрэгсэл
Багцын тодорхойлолт:
Хөхний арчдас/FTA картын дээжээс өндөр чанарын геномын ДНХ-г хурдан цэвэршүүлнэ.
◮RNase бохирдол байхгүй:Энэхүү иж бүрдэлд өгсөн зөвхөн ДНХ-ийн багана нь туршилтын явцад RNase нэмэлгүйгээр геномын ДНХ-ээс РНХ-г арилгах боломжтой бөгөөд лабораторийг экзоген РНазаар бохирдуулахаас сэргийлнэ.
◮Хурдан хурд:Foregene Protease нь ижил төстэй протеазуудаас өндөр идэвхжилтэй бөгөөд эд эсийн дээжийг хурдан шингээдэг;үйл ажиллагаа нь энгийн бөгөөд геномын ДНХ олборлох ажиллагааг 20-80 минутын дотор дуусгах боломжтой.
◮Тохиромжтой:Центрифуг нь тасалгааны температурт хийгддэг бөгөөд 4°С-ийн бага температурт центрифуг хийх, ДНХ-ийн этилийн спиртээр тунадасжуулах шаардлагагүй.
◮Аюулгүй байдал:Органик урвалж олборлох шаардлагагүй.
◮Өндөр чанар:Олж авсан геномын ДНХ нь том хэлтэрхийтэй, РНХ-гүй, RNase-гүй, маш бага ионы агууламжтай тул янз бүрийн туршилтын шаардлагыг хангаж чадна.
◮Бичил уусмалын систем:Энэ нь геномын ДНХ-ийн концентрацийг нэмэгдүүлэх боломжтой бөгөөд энэ нь доод урсгалыг илрүүлэх эсвэл туршилт хийхэд тохиромжтой.
Тодорхойлолт
Энэхүү иж бүрдэл нь амны хөндийн арчдас болон FTA картаас (цусны толбо) өндөр концентрацитай геномын ДНХ авах үр дүнтэй бөгөөд хурдан аргыг өгдөг.Манай компанийг ашиглаж байна'Зөвхөн ДНХ агуулсан цахиурын мембраны ээрэх багана ба томъёог Foregene Protease-тай хослуулан өндөр концентрацитай, өндөр чанартай геномын ДНХ-ийг 80 минутын дотор гаргаж авах боломжтой.Тусгайлан зохион бүтээсэн жижиг цэвэршүүлэх багана нь геномын ДНХ-г холбодог бөгөөд ДНХ-ийг бага хэмжээгээр ялгаж авах боломжтой.15μl) ялгах систем нь олж авсан геномын ДНХ-ийн концентрацийг нэмэгдүүлэх бөгөөд энэ нь доод урсгалыг илрүүлэх эсвэл туршилт хийхэд тохиромжтой.Уг иж бүрдэл нь нэг болон хэд хэдэн дээжийг нэг дор боловсруулах боломжтой бөгөөд цэвэршүүлэх процесст фенол, хлороформ зэрэг органик бодисыг ялган авах, изопропанол, этанолын тунадас зэрэг цаг хугацаа шаарддаггүй, үйл ажиллагаа нь энгийн бөгөөд цаг хугацаа хэмнэдэг.
Үзүүлэлтүүд
50 бэлтгэл
Иж бүрдэл хэсгүүд
| ST1 буфер |
| ST2 буфер |
| Шугаман акриламид |
| Буфер PW |
| Буфер ДБ |
| Буфер EB |
| Гадаад протеаз |
| Зөвхөн ДНХ багана |
| Зааварчилгаа |
Онцлог, давуу тал
-RNase-ийн бохирдол байхгүй: Иж бүрдэлд өгсөн Зөвхөн ДНХ-ийн багана нь туршилтын явцад RNase нэмэлгүйгээр геномын ДНХ-ээс РНХ-г арилгах боломжтой бөгөөд лабораторийг экзоген РНазаар бохирдуулахаас сэргийлнэ.
-Хурдан хурд: Foregene Protease нь ижил төрлийн протеазуудаас өндөр идэвхжилтэй, дээжийг хурдан шингээдэг;энгийн ажиллагаа.
-Тохиромжтой: Центрифуг нь тасалгааны температурт хийгддэг бөгөөд 4°С-ийн бага температурт центрифуг хийх, ДНХ-ийн этилийн спиртээр тунадасжуулах шаардлагагүй.
-Аюулгүй байдал: Органик урвалж авах шаардлагагүй.
-Өндөр чанар: Гарган авсан геномын ДНХ нь том хэлтэрхийтэй, РНХгүй, RNase агуулаагүй, ионы агууламж маш бага тул янз бүрийн туршилтын шаардлагад нийцдэг.
-Бичил элюцийн систем: Энэ нь геномын ДНХ-ийн концентрацийг нэмэгдүүлэх боломжтой бөгөөд энэ нь доод урсгалыг илрүүлэх эсвэл туршилт хийхэд тохиромжтой.
Иж бүрдэл програм
Энэ нь дараах дээжээс геномын ДНХ-ийг цэвэрлэхэд тохиромжтой: амны хөндийн арчдас, FTA карт (цусны толбо).
Хадгалалт ба Хадгалах хугацаа
-Энэ иж бүрдлийг тасалгааны температурт (15-25°С) хуурай нөхцөлд 12 сар хадгалах боломжтой;удаан хугацаагаар хадгалах шаардлагатай бол 2-8°С хэмд хадгалж болно.
Анхаарна уу: Хэрэв бага температурт хадгалвал уусмал нь хур тунадас унадаг.Хэрэглэхийн өмнө уусмалыг өрөөний температурт хэсэг хугацаанд иж бүрдэлд оруулахаа мартуузай.Шаардлагатай бол тунадасыг уусгахын тулд 37 градусын усан ваннд 10 минутын турш урьдчилан халааж, хэрэглэхийн өмнө холино.
-Foregene Protease уусмал нь өрөөний температурт удаан (3 сар) хадгалахад идэвхтэй байдаг өвөрмөц найрлагатай;Түүний үйл ажиллагаа, тогтвортой байдал нь 4 ° C-т хадгалагдахад илүү сайн байх тул 4 ° C-д хадгалахыг зөвлөж байна, үүнийг -20 ° C-д хадгалахгүй байхыг санаарай.
Цэвэршүүлэх багана бөглөрсөн байна
Энэхүү иж бүрдэлд ДНХ-ийн геномын экстракцийн үйл ажиллагаанд цэвэршүүлэх багана нь центрифугийн шатлалгүйгээр дээжийн ферментийн задралын хольц дээр шууд шингэдэг бөгөөд дээжийн ферментжилт бүрэн бус, өндөр зуурамтгай чанар зэргээс шалтгаалан цэвэршүүлэх багана бөглөрөх магадлалтай.
Дараах боломжит шалтгаанууд нь дараах байдалтай байна.
1. Эдийн дээжийн ферментийн боловсруулалт бүрэн бус.
Зөвлөмж: Foregene Protease-ийн дээж боловсруулах хугацааг зохих ёсоор сунгаж эсвэл дээд давхаргыг 12,000 эрг/мин (~13,400 × г) 5 минутын турш центрифугийн дараа авч болно.
2. Эд эсийн дээж эсвэл том эдийг хэт их хэрэглэх.
Зөвлөмж: Дээжинд байгаа арчдас 1-ээс хэтрэхгүй байх нь дээр;хэрэв дээж хэт том байвал буфер ST1, Foregene Protease, ST2 буферийн тунг зохих хэмжээгээр нэмэгдүүлнэ.
3. Дээжний зуурамтгай чанар хэт өндөр байна.
Зөвлөмж: Дээжийг геномын ДНХ олборлохын өмнө 10 мМ Tris-HCl-ээр зохих ёсоор шингэлж болно.
4. Цусны картын хэлтэрхий сорсон байна.
Зөвлөмж: Цусны толбо (FTA Card) геномын олборлолтын 6-р алхамын түр зуурын центрифугийн хугацааг зохих ёсоор сунгаж болно.
Бага ургац эсвэл ДНХ байхгүй
Дээжийн гарал үүсэл, дээж хадгалах нөхцөл, дээж бэлтгэх, манипуляци хийх гэх мэт геномын ДНХ-ийн гарцад нөлөөлдөг олон янзын хүчин зүйлүүд байдаг.
Олборлох явцад геномын ДНХ авах боломжгүй
Боломжит шалтгаанууд нь дараах байдалтай байна.
1. Дээжийг буруу хадгалах эсвэл хэт удаан хадгалах нь геномын ДНХ-ийн задралд хүргэдэг.
Зөвлөмж: Амны хөндийн арчдасыг шинээр дээж авах нь зүйтэй бөгөөд ДНХ-ийн геномын задралын үйл ажиллагаанд хадгалсан арчдас ашиглахыг зөвлөдөггүй;Цусны толбоны дээж нь чанарын шаардлага хангасан байх ёстой бөгөөд хадгалах хугацаа хэт урт байх ёсгүй.
2. Эд эсийг хэт бага хэрэглэх нь харгалзах геномын ДНХ-г гаргаж авахгүй байж болзошгүй.
Зөвлөмж: Үйл ажиллагааны зааварт байгаа амны хөндийн арчдас авах зааварчилгааг дагаж, геномын ДНХ-г гаргаж авахын тулд амны хөндийн арчдас руу хангалттай эсийг хавсаргахын тулд аль болох олон удаа арчих;Цусны толбоны дээж авахын тулд цусны толбо зүсэх хэсгийг зохих ёсоор нэмэгдүүлэх боломжтой.
3. Foregene Protease нь зохисгүй хадгалагдаж, улмаар идэвхи нь буурч, идэвхгүй болдог.
Зөвлөмж: Foregene Protease-ийн хадгалалтын нөхцлийг баталгаажуулах эсвэл ферментийн урвалын шинэ Foregene Protease-ээр солих.
4. Иж бүрдлийг буруу хадгалсан эсвэл хадгалах хугацаа хэтэрхий урт байгаа нь иж бүрдэл дэх зарим бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн эвдрэлд хүргэдэг.
Зөвлөмж: Холбогдох процедурт зориулж хөхний арчдас ДНХ тусгаарлах шинэ иж бүрдэл худалдаж аваарай.
5. Буфер ДБ нь абсолют этанол нэмдэггүй.
Зөвлөмж: Буфер ДБ нь абсолют этанолын зөв хэмжээг нэмж байгааг баталгаажуулна уу.
6. Силикон хальсанд уусгагчийг зөв нэмээгүй.
Зөвлөмж: Силикон мембраны голд 65 ° C-ийн урьдчилан халаасан уусмалын дуслыг нэмж, шүүрлийн үр ашгийг нэмэгдүүлэхийн тулд өрөөний температурт 5 минут байлгана.
Бага бүтээмжтэй геномын ДНХ тусгаарлагдсан
Дараах боломжит шалтгаанууд нь дараах байдалтай байна.
1. Дээжийг буруу хадгалах эсвэл хэт удаан хадгалах нь геномын ДНХ-ийн задралд хүргэдэг.
Зөвлөмж: Амны хөндийн арчдасыг шинээр дээж авсан нь дээр бөгөөд хадгалсан арчдасыг геномын ДНХ-ийн задралд ашиглаж болохгүй.
2. Хэрэв эд эсийн дээжийн хэмжээ хэтэрхий бага байвал олборлосон геномын ДНХ-ийн агууламж бага байх болно.
Зөвлөмж: Үйл ажиллагааны зааварт заасан амны хөндийн арчдасаас дээж авах зааврыг дагаж, геномын ДНХ гаргаж авахын тулд амны хөндийн арчдас руу хангалттай эсийг хавсаргахын тулд аль болох олон удаа арчина.
3. Foregene Protease нь зохисгүй хадгалагдаж, улмаар идэвхи нь буурч, идэвхгүй болдог.
Зөвлөмж: Foregene Protease-ийн хадгалалтын нөхцлийг баталгаажуулах эсвэл ферментийн урвалын шинэ Foregene Protease-ээр солих.
4. Угаах бодисын асуудал.
Зөвлөмж: Буфер EB-г шүүрүүлэхэд ашиглах;ddH ашиглаж байгаа бол2O эсвэл бусад шүүрүүлэгчийн рН нь 7.0-8.5 хооронд байгаа эсэхийг баталгаажуулна.
5. Элюатыг дуслаар зөв нэмээгүй.
Зөвлөмж: Элюент дуслыг силикон мембраны голд нэмж, тасалгааны температурт 5 минут байлгана.
6. Угаах шингэн нь хэтэрхий бага хуримтлагддаг.
Зөвлөмж: Зааварт заасан шаардлагын дагуу геномын ДНХ-ийн шүүрэлтийг 15 мкл-ээс багагүй хэмжээгээр хэрэглэнэ.
Тусгаарлагдсан геномын ДНХ-ийн цэвэршилт бага
Геномын ДНХ-ийн цэвэршилт бага байгаа нь дараах туршилтуудын бүтэлгүйтэл эсвэл хангалтгүй үр дүнд хүргэдэг, тухайлбал: ферментийг задлах боломжгүй, ПГУ-ын генийн хэсгийг авах боломжгүй гэх мэт.
Боломжит шалтгаанууд нь дараах байдалтай байна.
1. Гетеропротейны бохирдол, РНХ-ийн бохирдол.
Шинжилгээ: Цэвэршүүлэх баганыг Buffer PW ашиглан угаагаагүй;Buffer PW угаах цэвэршүүлэх баганыг зөв төвөөс зугтах хурдыг ашиглан угаагаагүй.
Зөвлөмж: Этанол нэмэхийн өмнө хэт шингэнд хур тунадас байхгүй эсэхийг шалгаарай;зааврын дагуу цэвэршүүлэх баганыг угаахаа мартуузай, энэ алхамыг орхигдуулж болохгүй.
2. Бохирдлын ионы бохирдол.
Шинжилгээ: Буфер WB угаах цэвэршүүлэх баганыг орхисон эсвэл зөвхөн нэг удаа угаасан тул ионы бохирдол үүссэн.
Зөвлөмж: Үлдэгдэл ионуудыг аль болох арилгахын тулд Buffer WB-ийг зааврын дагуу 2 удаа угаахаа мартуузай.
3. РНХ ферментийн бохирдол.
Шинжилгээ: Гадаад RNases буферт нэмэгдсэн;Буферийн PW угаах ажиллагаа буруу байсан тул RNase-ийн үлдэгдэл үүсч, in vitro транскрипц гэх мэт доод урсгалын РНХ-ийн туршилтын үйл ажиллагаанд нөлөөлсөн.
Зөвлөмж: Foregene цувралын нуклейн хүчлийн тусгаарлах иж бүрдэл нь нэмэлт RNase нэмэлгүйгээр РНХ-г арилгах боломжтой тул хөхний арчдас/FTA картын ДНХ тусгаарлах иж бүрдэлд RNase нэмэх шаардлагагүй;Buffer PW угаах цэвэршүүлэх баганын зааврыг дагаж мөрдөх ёстой бөгөөд энэ алхамыг орхигдуулж болохгүй.
4. Этанолын үлдэгдэл.
Шинжилгээ: Буфер WB цэвэршүүлэх баганыг угаасны дараа хоосон хоолойн центрифуг хийгээгүй.
Зөвлөмж: Зааврын дагуу хоосон хоолойн центрифугийн ажиллагааг зөв хийнэ.
5. Бусад хольцын бохирдол.
Шинжилгээ: Хадгалсан дээж эсвэл тусгай дээжийг урьдчилан боловсруулаагүй болно.
Зөвлөмж: Зааврын дагуу дээжийг сайтар урьдчилан боловсруулна.
