Олшруулах дохио байхгүй

1. Иж бүрдэлд агуулагдах Taq DNA Polymerase нь буруу хадгалалт эсвэл хугацаа дууссаны улмаас үйл ажиллагаагаа алддаг.
Зөвлөмж: Багцыг хадгалах нөхцлийг баталгаажуулах;ПГУ-ын системд зохих хэмжээний Taq ДНХ Полимеразыг дахин нэмэх эсвэл холбогдох туршилтуудад зориулж бодит цагийн ПГУ-ын шинэ хэрэгсэл худалдаж аваарай.

2.ДНХ-ийн загварт Так ДНХ Полимеразын дарангуйлагч маш их байдаг.
Зөвлөмж: Загварыг дахин цэвэршүүлэх эсвэл ашигласан загварын хэмжээг багасгах.

3. Mg2+ концентраци нь тохиромжгүй.
Зөвлөмж: Бидний санал болгож буй 2× Бодит ПГУ-ын хольцын Mg2+ концентраци нь 3.5 мм байна.Гэсэн хэдий ч зарим тусгай праймер болон загваруудын хувьд Mg2+ концентраци илүү өндөр байж болно.Тиймээс та Mg2+ концентрацийг оновчтой болгохын тулд MgCl2-ийг шууд нэмж болно.Оновчлолын хувьд Mg2+ 0.5mM-ийг нэмэгдүүлэхийг зөвлөж байна.

4. ПГУ-ын олшруулах нөхцөл тохиромжгүй, праймерын дараалал эсвэл концентраци буруу байна.
Зөвлөмж: праймерын дарааллын зөвийг баталгаажуулж, праймер нь муудаагүй;хэрэв олшруулалтын дохио сайн биш бол зөөлрүүлэх температурыг бууруулж, праймерын концентрацийг зохих ёсоор тохируулахыг хичээ.

5.Загварын хэмжээ хэт бага эсвэл хэт их байна.
Зөвлөмж: Загварыг шугаманжуулах градиент шингэрүүлэлт хийж, бодит цагийн ПГУ-ын туршилтанд хамгийн сайн ПГУ-ын нөлөө бүхий загварын концентрацийг сонго.

NTC нь хэт өндөр флюресценцийн утгатай байна

1.Ашиглалтын явцад үүссэн урвалжийн бохирдол.
Зөвлөмж: Бодит цагийн ПГУ-ын туршилтын шинэ урвалжаар солих.

2.ПГУ-ын урвалын системийг бэлтгэх явцад бохирдол үүссэн.
Зөвлөмж: Ашиглалтын явцад шаардлагатай хамгаалалтын арга хэмжээ авах, тухайлбал: латекс бээлий өмсөх, шүүлтүүртэй пипеткийн үзүүр ашиглах гэх мэт.

3.Праймерууд доройтож, праймеруудын доройтол нь өвөрмөц бус олшруулалтыг бий болгоно.
Зөвлөмж: SDS-PAGE электрофорез ашиглан праймерууд доройтсон эсэхийг илрүүлж, бодит цагийн ПГУ-ын туршилтанд зориулж шинэ праймераар солино.

Праймер димер буюу өвөрмөц бус олшруулалт

1. Mg2+ концентраци нь тохиромжгүй.
Зөвлөмж: Бидний санал болгож буй 2× Real PCR EasyTM Mix-ийн Mg2+ концентраци нь 3.5 мМ байна.Гэсэн хэдий ч зарим тусгай праймер болон загваруудын хувьд Mg2+ концентраци илүү өндөр байж болно.Тиймээс та Mg2+ концентрацийг оновчтой болгохын тулд MgCl2-ийг шууд нэмж болно.Оновчлолын хувьд Mg2+ 0.5mM-ийг нэмэгдүүлэхийг зөвлөж байна.

2. ПГУ-ын температур хэт бага байна.
Зөвлөмж: ПГУ-ын температурыг 1℃ эсвэл 2℃-аар нэмэгдүүлэх.

3. ПГУ-ын бүтээгдэхүүн хэтэрхий урт байна.
Зөвлөмж: Бодит цагийн ПГУ-ын бүтээгдэхүүний урт нь 100-150bp, 500bp-ээс ихгүй байх ёстой.

4.Праймерууд доройтож, праймеруудын доройтол нь тодорхой олшруулалтын харагдах байдалд хүргэнэ.
Зөвлөмж: SDS-PAGE электрофорез ашиглан праймерууд доройтсон эсэхийг илрүүлж, бодит цагийн ПГУ-ын туршилтанд зориулж шинэ праймераар солино.

5. ПГУ-ын систем буруу, эсвэл систем нь хэтэрхий жижиг байна.
Зөвлөмж: ПГУ-ын урвалын систем нь хэтэрхий жижиг нь илрүүлэх нарийвчлал буурахад хүргэдэг.Бодит цагийн ПГУ-ын туршилтыг дахин явуулахын тулд тоон ПГУ-ын багажийн санал болгосон урвалын системийг ашиглах нь хамгийн сайн арга юм.

Тоон утгын давтагдах чадвар муу

1. Багаж буруу ажиллаж байна.
Зөвлөмж: Багажны ПГУ-ын нүх тус бүрийн хооронд алдаа гарч болзошгүй тул температурын удирдлага эсвэл илрүүлэх явцад давтагдах чадвар муу болно.Холбогдох хэрэгслийн зааврын дагуу шалгана уу.

2. Дээжний цэвэр байдал сайн биш байна.
Зөвлөмж: Цэвэр бус дээж нь загвар болон праймерын цэвэр байдлыг багтаасан туршилтын давтагдах чадвар муудахад хүргэдэг.Загварыг дахин цэвэршүүлэх нь хамгийн сайн арга бөгөөд праймеруудыг SDS-PAGE-ээр хамгийн сайн цэвэршүүлдэг.

3. ПГУ-ын системийг бэлтгэх, хадгалах хугацаа хэт урт байна.
Зөвлөмж: ПГУ-ын туршилтанд зориулж бодит цагийн ПГУ-ын системийг бэлтгэсний дараа шууд хэрэглээрэй, үүнийг удаан хугацаагаар орхиж болохгүй.

4. ПГУ-ын олшруулах нөхцөл тохиромжгүй, праймерын дараалал эсвэл концентраци буруу байна.
Зөвлөмж: праймерын дарааллын зөвийг баталгаажуулж, праймер нь муудаагүй;хэрэв олшруулалтын дохио сайн биш бол зөөлрүүлэх температурыг бууруулж, праймерын концентрацийг зохих ёсоор тохируулахыг хичээ.

5. ПГУ-ын систем буруу, эсвэл систем нь хэтэрхий жижиг байна.
Зөвлөмж: ПГУ-ын урвалын систем нь хэтэрхий жижиг нь илрүүлэх нарийвчлал буурахад хүргэдэг.Бодит цагийн ПГУ-ын туршилтыг дахин явуулахын тулд тоон ПГУ-ын багажийн санал болгосон урвалын системийг ашиглах нь хамгийн сайн арга юм.