Cell Direct RT qPCR Kit—Takman Direct Cell Lysis Cell Ready One-alte qRT-PCR Kits Probe
Тодорхойлолт
Энэхүү бүтээгдэхүүн нь өвөрмөц лизисын буфер системийг ашиглан өсгөвөрлөсөн эсийн дээжээс RT-qPCR урвалд зориулж РНХ-ийг хурдан ялгаруулж, цаг хугацаа шаардсан, хөдөлмөр их шаарддаг РНХ цэвэршүүлэх процессыг арилгадаг бөгөөд шаардлагатай РНХ загварыг олж авахад ердөө 7 минут зарцуулдаг. 5 × Шууд RT Mix, 2 × Шууд qPCR Mix-Taqman-ийн тусламжтайгаар PCR-ээр хурдан шуурхай, үр дүнтэй үр дүнд хүрдэг.
5× Шууд RT Mix ба 2× Шууд qPCR Mix-Taqman нь дарангуйлагчийг тэсвэрлэх чадвартай бөгөөд загвар болгон хэмжих дээжийн лизатыг ашиглан урвуу болон тусгай өсгөлтийг үр дүнтэй хийж чадна.Урвалж нь Foregene Reverse Transscriptase, Hot D-Taq DNA Polimerase, dNTPs, MgCl агуулдаг.2, Reaction Buffer, PCR Optimizer, Stabilizer зэрэг нь дээжийг хурдан, хялбар илрүүлэхийн тулд задралын буфертэй хамт хэрэглэх боломжтой, өндөр мэдрэмж, өвөрмөц, тогтвортой байдлын шинж чанартай.
Үзүүлэлтүүд
200×20μл Rxns, 1000×20μl Rxns
Иж бүрдэл хэсгүүд
| QuickEasyTMCell Direct RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
| Иж бүрдэл хэсгүүд 20μl qPCR урвалын систем | DRT-01021 | DRT-01022 | Анхаарна уу | |
| 200 Т | 1000 Т | |||
|
Хэсэг I | Буфер CL | 4 мл | 20 мл | Эсийн задрал |
| Foregene Protease Plus II | 80 мкл | 400 мкл | ||
| буфер ST | 400 мкл | 1 мл × 2 | ||
|
Хэсэг II | ДНХ баллуур | 80 мкл | 400 мкл | |
| 5×Шууд RT Mix * | 160 мкл | 800 мкл | RT | |
| 2× Шууд qPCR Mix-Taqman * | 1 мл × 2 | 1.7 мл × 6 | qPCR | |
| 20×ROX лавлагаа будаг | 40 мкл | 200 мкл | ||
| RNase-гүй ddH2O | 1.7 мл | 10 мл | ||
| Заавар гарын авлага | 1 ширхэг | 1 ширхэг | ||
*:Cell Lysis, 5×Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman-ийг тусад нь худалдан авч болно.
Онцлог, давуу тал
■Энгийн бөгөөд үр дүнтэй: Cell Direct RT технологийн тусламжтайгаар РНХ-ийн дээжийг ердөө 7 минутын дотор авах боломжтой.
■ Түүврийн эрэлт бага, 10 хүртэлх нүдийг турших боломжтой.
■ Өндөр нэвтрүүлэх чадвар: 384, 96, 24, 12, 6 цооногийн ялтсуудад өсгөвөрлөсөн эсүүдийн РНХ-ийг хурдан илрүүлдэг.
■ ДНХ баллуур нь суллагдсан геномыг хурдан устгаж, дараагийн туршилтын үр дүнд үзүүлэх нөлөөллийг эрс багасгадаг.
■ Оновчтой RT ба qPCR систем нь хоёр үе шаттай RT-PCR урвуу транскрипцийг илүү үр дүнтэй, ПГУ-ыг илүү тодорхой болгож, RT-qPCR урвалын дарангуйлагчдад илүү тэсвэртэй болгодог.
Иж бүрдэл програм
Хэрэглэх хүрээ: өсгөвөрлөсөн эсүүд.
- Дээж задралаар ялгарсан РНХ: зөвхөн энэ багцын RT-qPCR загварт хамаарна.
- Энэхүү иж бүрдлийг дараах зорилгоор ашиглаж болно: генийн экспрессийн шинжилгээ, siRNA-аар дамжсан генийг намжаах нөлөөг шалгах, эмийн скрининг гэх мэт.
Хадгалалт ба Хадгалах хугацаа
Энэ багцын I хэсгийг 4-т хадгалах ёстой℃;II хэсгийг -20 хэмд хадгална.
Foregene Protease Plus II-ийг 4 хэмд хадгална℃, -20℃ хэмд хөлдөөж болохгүй.
Урвалж 2×Шууд qPCR Mix-Taqman-ийг -20 хэмд хадгална℃харанхуйд;байнга хэрэглэдэг бол 4-т ч бас хадгалж болно℃ богино хугацаанд хадгалах (10 хоногийн дотор ашиглах).
Бодит цагийн ПГУ-ын праймерын дизайны зарчим
Урагшаа праймер ба урвуу праймер
Бодит цагийн ПГУ-ын хувьд праймер дизайн маш чухал юм.Праймерууд нь ПГУ-ын олшруулалтын өвөрмөц байдал, үр дүнтэй холбоотой бөгөөд дараах зарчмуудыг үндэслэн боловсруулж болно.
- Праймерын урт: 18-30bp.
- GC агууламж: 40-60%.
- Tm утга: Primer 5 гэх мэт праймер дизайны програм хангамж нь праймерын Tm утгыг өгч чадна.Урсгалын дээд ба доод талын праймеруудын Tm утгууд аль болох ойр байх ёстой.Tm-ийн тооцооллын томъёог мөн ашиглаж болно: Tm = 4 ° C (G + C) + 2 ° C (A + T).ПГУ-ыг хийхдээ праймерын Tm-ээс доош температурыг 5 ° C-аас бага температурыг ерөнхийд нь зөөлрүүлэх температур гэж сонгоно (засварлах температурын харгалзах өсөлт нь ПГУ-ын урвалын өвөрмөц байдлыг нэмэгдүүлдэг).
- Праймер ба ПГУ-ын бүтээгдэхүүн:
- Дизайн праймер ПГУ-ын олшруулалтын бүтээгдэхүүний урт нь 100-150bp байх нь дээр.
- Загварын хоёрдогч бүтцийн хэсэгт дизайны праймераас аль болох зайлсхийх хэрэгтэй.
- Урсгалын дээд ба доод талын праймеруудын 3′ төгсгөлийн хооронд 2 ба түүнээс дээш нэмэлт суурь үүсэхээс зайлсхий.
- Праймер 3′ терминалын суурь нь нэмэлт 3 дараалсан G эсвэл C-тэй байж болохгүй.
- Праймерууд өөрсдөө нэмэлт бүтэцтэй байж болохгүй, эс тэгвээс үсний хавчаар бүтэц үүсч, ПГУ-ын олшруулалтад нөлөөлнө.
- ATCG-ийг праймерын дарааллаар аль болох жигд тарааж, 3′ терминалын суурийг T гэж үзэхээс зайлсхийх хэрэгтэй.
Хавсралт1:CшуудRT-qPCR Бүрэлдэхүүн хэсэгt нэмэлт багц
1. Эсийн задралын уусмал
| Эсийн задралын уусмал | |||
| Иж бүрдэл хэсгүүд (24 худгийн задралын систем / худаг) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 Т | 500 Т | ||
| ХэсэгI | Буфер CL | 20 мл | 100 мл |
| Foregene Protease Plus II | 400 мкл | 1 мл × 2 | |
| буфер ST | 1 мл × 2 | 10 мл | |
| ХэсэгII | ДНХ баллуур | 400 мкл | 1 мл × 2 |
| RT Mix | |
| Иж бүрдэл хэсгүүд (20 мкл урвалын систем) | DRT-01011-B1 |
| 200 Т | |
| 5 × Шууд RT Mix | 800 мкл |
| RNase-гүй ddH2O | 1.7 мл × 2 |
| qPCR холимог | ||
| Иж бүрдэл хэсгүүд (20 мкл урвалын систем) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 Т | 1000 Т | |
| 2× Шууд qPCR Mix-Taqman | 1 мл × 2 | 1.7 мл × 6 |
| 20× ROX лавлагаа будаг | 40 мкл | 200 мкл |
| RNase-гүй ddH2O | 1.7 мл | 10 мл |
Зааварчилгааны гарын авлага:
