(96-худаг) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR Kit – Taqman
Тодорхойлолт
The(96-худаг) QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR багц–Такманхангадагөвөрмөц лизисын буфер системto РНХ-г хурдан ялгаруулнаөсгөвөрлөсөн эсээсRT-qPCR урвалын дээжүүд нь цаг хугацаа, хөдөлмөр их шаарддаггүйРНХ цэвэршүүлэх үйл явц бөгөөд шаардлагатай РНХ загварыг авахад ердөө 7 минут л болно.The5 × Шууд RT Mixболон2× Шууд qPCR Mix-SYBRхайрцагт өгсөн хурдан бөгөөдбодит цагийн тоон мэдээллийг үр дүнтэй олж авахПГУ-ын үр дүн.
5 × Шууд RT Mix ба 2 × Шууд qPCR Mix-Taqman нь дарангуйлагчийг тэсвэрлэх чадвартай бөгөөд урвуу транскрипцийг үр дүнтэй болгох, тодорхой өсгөвөрлөх загвар болгон турших дээжийн лизатыг ашиглаж болно.Урвалж нь РНХ-тай өндөр холбоотой Foregene өвөрмөц урвуу транскриптаза, мөн Халуун D-Taq ДНХ полимераза, dNTPs, MgCl агуулдаг.2 , урвалын буфер, ПГУ-ын оновчтой, тогтворжуулагч, мөн дээжийг хурдан, хялбар, үнэн зөв илрүүлэхийн тулд задралын буфертэй хамт хэрэглэж болох бөгөөд өндөр мэдрэмжтэй, хүчтэй өвөрмөц чанар, сайн тогтвортой байдлын шинж чанаруудтай.
Энэхүү иж бүрдэл нь 96 цооног өсгөвөрлөсөн эсийн бичил системийн задралд чиглэгддэг бөгөөд жигд, тогтвортой байдал сайтай;иж бүрдэл хэсгүүд нь 96 задралын урвал, 96 урвуу транскрипцийн урвал, 96 × 2 qPCR урвалаар хангадаг бөгөөд энэ нь нэг удаагийн хэрэглээнд зориулагдсан 96 цооногийн эсийн хавтанг хангаж, урвалжийг олон удаа нээх, хөлдөөх, гэсгээх, урвалжийн үйл ажиллагааны доройтлоос үүсэх бохирдлоос сэргийлнэ.
Иж бүрдэл хэсгүүд
| Багцын найрлага ( 50 μL задралын систем/20 мклRT урвалын систем /20μL qPCR урвалын систем) | DRT-03021 | Тайлбар | |
| 96Т | |||
| ХэсэгI | БуферCL | 5 мл | ЭсЛизис |
| ГадаадПротеаз Plus II | 100 μL | ||
| БуферST | 500 μL | ||
| Хэсэг II | ДНХБаллуур | 100 μL | |
| 5 × Шууд RT Mix | 400 μL | RT | |
| 2× Шууд qPCR холимог-Такман | 1 мL × 2 | qPCR | |
| 50 × ROX лавлагаа будаг | 400мкл | ||
| RNase- ҮнэгүйddH2 O | 1.7 мл |
| |
| Mжилийн | 1 хэсэг | 1 порц | |
*: Лизисийн урвалж ДНХ баллуур нь багцын II хэсэгт багтсан болно;Cell Lysis, RT, qPCR бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг тусад нь худалдан авч болно.
Онцлог, давуу тал
■Энгийн бөгөөд үр дүнтэй: Cell Direct RT технологийн тусламжтайгаар РНХ-ийн дээжийг ердөө 7 минутын дотор авах боломжтой.
■ Түүврийн эрэлт бага, 10 хүртэлх нүдийг турших боломжтой.
■ Өндөр нэвтрүүлэх чадвар: 384, 96, 24, 12, 6 цооногийн ялтсуудад өсгөвөрлөсөн эсүүдийн РНХ-ийг хурдан илрүүлдэг.
■ ДНХ баллуур нь суллагдсан геномыг хурдан устгаж, дараагийн туршилтын үр дүнд үзүүлэх нөлөөллийг эрс багасгадаг.
■ Оновчтой RT ба qPCR систем нь хоёр үе шаттай RT-PCR урвуу транскрипцийг илүү үр дүнтэй, ПГУ-ыг илүү тодорхой болгож, RT-qPCR урвалын дарангуйлагчдад илүү тэсвэртэй болгодог.
Иж бүрдэл програм
Хэрэглэх хүрээ: өсгөвөрлөсөн эсүүд.
- Дээж задралаар ялгарсан РНХ: зөвхөн энэ багцын RT-qPCR загварт хамаарна.
- Энэхүү иж бүрдлийг дараах зорилгоор ашиглаж болно: генийн экспрессийн шинжилгээ, siRNA-аар дамжсан генийг намжаах нөлөөг шалгах, эмийн скрининг гэх мэт.
Хадгалалт ба Хадгалах хугацаа
Энэ багцын I хэсгийг 4-т хадгалах ёстой℃;II хэсгийг -20 хэмд хадгална.
Foregene Protease Plus II-ийг 4 хэмд хадгална℃, -20℃ хэмд хөлдөөж болохгүй.
Урвалж 2×Шууд qPCR Mix-Taqman-ийг -20 хэмд хадгална℃харанхуйд;байнга хэрэглэдэг бол 4-т ч бас хадгалж болно℃ богино хугацаанд хадгалах (10 хоногийн дотор ашиглах).
Бодит цагийн ПГУ-ын праймерын дизайны зарчим
Урагшаа праймер ба урвуу праймер
Бодит цагийн ПГУ-ын хувьд праймер дизайн маш чухал юм.Праймерууд нь ПГУ-ын олшруулалтын өвөрмөц байдал, үр дүнтэй холбоотой бөгөөд дараах зарчмуудыг үндэслэн боловсруулж болно.
- Праймерын урт: 18-30bp.
- GC агууламж: 40-60%.
- Tm утга: Primer 5 гэх мэт праймер дизайны програм хангамж нь праймерын Tm утгыг өгч чадна.Урсгалын дээд ба доод талын праймеруудын Tm утгууд аль болох ойр байх ёстой.Tm-ийн тооцооллын томъёог мөн ашиглаж болно: Tm = 4 ° C (G + C) + 2 ° C (A + T).ПГУ-ыг хийхдээ праймерын Tm-ээс доош температурыг 5 ° C-аас бага температурыг ерөнхийд нь зөөлрүүлэх температур гэж сонгоно (засварлах температурын харгалзах өсөлт нь ПГУ-ын урвалын өвөрмөц байдлыг нэмэгдүүлдэг).
- Праймер ба ПГУ-ын бүтээгдэхүүн:
- Дизайн праймер ПГУ-ын олшруулалтын бүтээгдэхүүний урт нь 100-150bp байх нь дээр.
- Загварын хоёрдогч бүтцийн хэсэгт дизайны праймераас аль болох зайлсхийх хэрэгтэй.
- Урсгалын дээд ба доод талын праймеруудын 3′ төгсгөлийн хооронд 2 ба түүнээс дээш нэмэлт суурь үүсэхээс зайлсхий.
- Праймер 3′ терминалын суурь нь нэмэлт 3 дараалсан G эсвэл C-тэй байж болохгүй.
- Праймерууд өөрсдөө нэмэлт бүтэцтэй байж болохгүй, эс тэгвээс үсний хавчаар бүтэц үүсч, ПГУ-ын олшруулалтад нөлөөлнө.
- ATCG-ийг праймерын дарааллаар аль болох жигд тарааж, 3′ терминалын суурийг T гэж үзэхээс зайлсхийх хэрэгтэй.
Хавсралт1:CшуудRT-qPCR Бүрэлдэхүүн хэсэгt нэмэлт багц
1. Эсийн задралын уусмал
| Эсийн задралын уусмал | |||
| Иж бүрдэл хэсгүүд (24 худгийн задралын систем / худаг) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 Т | 500 Т | ||
| ХэсэгI | Буфер CL | 20 мл | 100 мл |
| Foregene Protease Plus II | 400 мкл | 1 мл × 2 | |
| буфер ST | 1 мл × 2 | 10 мл | |
| ХэсэгII | ДНХ баллуур | 400 мкл | 1 мл × 2 |
| RT Mix | |
| Иж бүрдэл хэсгүүд (20 мкл урвалын систем) | DRT-01011-B1 |
| 200 Т | |
| 5 × Шууд RT Mix | 800 мкл |
| RNase-гүй ddH2O | 1.7 мл × 2 |
| qPCR холимог | ||
| Иж бүрдэл хэсгүүд (20 мкл урвалын систем) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 Т | 1000 Т | |
| 2× Шууд qPCR Mix-Taqman | 1 мл × 2 | 1.7 мл × 6 |
| 20× ROX лавлагаа будаг | 40 мкл | 200 мкл |
| RNase-гүй ddH2O | 1.7 мл | 10 мл |
Зааварчилгааны гарын авлага:
