Escherichia Coli O157: H7 нуклейн хүчил илрүүлэх иж бүрдэл (ПГУ-ын флюресцент датчикийн арга/лиофилизаци)
Багцын тодорхойлолт:
Cat.NoFP103
Энэ нь хоол хүнс, тэжээл, усны дээж, хүрээлэн буй орчны дээжээс E. coli O157:H7-ийг хурдан илрүүлэх, илрүүлэхэд ашигладаг.
Тодорхойлолт
Үүнийг ашигладагхоол хүнс, тэжээл, усны дээж, хүрээлэн буй орчны дээжээс E. coli O157:H7-ийг хурдан илрүүлэх, илрүүлэх .
[Туршилтын зарчим]
Флюресцент ПГУ-ын технологийн зарчмын дагуу тусгай праймерууд болон Taqman датчикууд нь Escherichia coli O157: H7-ийн тодорхой генд зориулагдсан бөгөөд флюресцент ПГУ-ын хэрэглүүрээр илрүүлснээр Escherichia coli O157: H7 ДНХ-ийг чанарын хувьд илрүүлэх боломжтой.
Багцын агуулга
Тайлбар: ROX сувгийн датчик ороогүй болно.
| Cөрсөлдөгчид | Тодорхойлолт | Qнэгдмэл байдал |
| Буфер А | Хоолой | 1 |
| Буфер Б | Хоолой | 1 |
| Эерэг хяналт | Хоолой | 1 |
| Сөрөг хяналт | Хоолой | 1 |
Хүлээгдэж буй хэрэглээ
Үүнийг ашигладаг хоол хүнс, тэжээл, усны дээж, хүрээлэн буй орчны дээжээс E. coli O157:H7-ийг хурдан илрүүлэх, илрүүлэх .
Хадгалах нөхцөл ба хүчинтэй хугацаа
Харанхуйд -20 хэмд хадгалж, дахин хөлдөөх, гэсгээхээс сэргийлнэ.
Хүчинтэй байх хугацаа нь 12сар, үйлдвэрлэсэн огноог гадна баглаа боодол дээр харуулав.
Багаж хэрэгсэл ба хэрэглээний зүйлс
Флюресцент тоон ПГУ-ын багаж, пипеткийн буу ба тохирох үзүүрүүд, эргүүлэг сэгсэрдэг, мини центрифуг.
Хэрэглээ
1. Дээж боловсруулах
1.1 Дээжийн төрөл: Энэхүү иж бүрдэл нь хоол хүнс, тэжээл, усны дээж болон Escherichia coli O157:H7-ээр бохирдсон байж болзошгүй бусад сорьцонд тохиромжтой.Гүн боловсруулсан махан бүтээгдэхүүн, ундаа болон пигмент агуулсан бусад бодисын хувьд флюресценцийн дохионы цуглуулгад нөлөөлөхгүйн тулд тэдгээрийг зайлж угаана.
1.2 Дээж боловсруулах: Дээж бэлтгэх, баяжуулах өсгөвөрлөх, гэдэсний савханцар O157: H7-г тусгаарлахын тулд "GB 4789.10-2016 Хүнсний аюулгүй байдлын үндэсний стандарт хүнсний гэдэсний гэдэсний савханцар O157-ийн микробиологийн шинжилгээ: H7 сорил"-оос харна уу.
- Nюклейн хүчлийн олборлолт
1.5 мл центрифугийн хоолойд 20 мл баяжуулах уусмал авч, 200 мкл микробын лизат (нэмэлт иж бүрдэл шаардлагатай) нэмж 30 секунд эргүүлж, богино хугацаанд центрифуг хийж, хойш тавина.
Тайлбар: Лизатаас нуклейн хүчлийг гаргаж авах ажлыг 10 минутын дотор дуусгах ёстой бөгөөд үүнийг удаан хугацаагаар хадгалах боломжгүй.
3. Нуклейн хүчлийн олшруулалт
3.1 Ашиглахын тулд флюресцент тоон ПГУ-ын багажийг асаана уу.
Иж бүрдэлээс буфер А ба Б буферийг сайтар хайлуулж, богино хугацаанд центрифуг хийнэ.ПГУ-ын урвалын хоолой бүрт 18 мкл буфер А ба 2 мкл В буфер нэмнэ.Дараа нь сөрөг хяналт, гаргаж авсан нуклейн хүчил, эерэг хяналт тус бүрээс 5 мл-ийг ПГУ-ын урвалын хуруу шилэнд хийж, хоолойг таглаж, богино хугацаанд центрифуг хийнэ.
3.3 ПГУ-ын урвалын хоолойг флюресцент ПГУ-ын машин руу шилжүүлж, олшруулах туршилтыг хийхдээ дараах процедурыг ашиглана: урвалын системд 25 мл-ийг сонгож, цикл бүрт 60°С-т флюресценцийн дохиог цуглуулж, илрүүлэх сувгийн хувьд FAM-ийг сонгоно.
| Алхам | Програм | Циклийн тоо |
| 1 | 37℃ 5 мин | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3 мин | 1 |
| 3 | 95 ° C 15 секунд | 4 0 |
| 60 ℃ 30 секунд (флюресценц цуглуулах) |
Асуудлыг шинжлэхэд зориулсан гарын авлага
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
РНХ гаргаж авах боломжгүй эсвэл нуклейн хүчлийн гарц бага байна
Дээжийн РНХ-ийн агууламж, үйл ажиллагааны арга, шингэний хэмжээ гэх мэт нөхөн сэргээх үр ашигт нөлөөлдөг олон хүчин зүйл байдаг.
Нийтлэг шалтгаануудын шинжилгээ:
1. Ашиглалтын явцад мөсөн банн эсвэл бага температурт (4 ° C) центрифуг хийх.
Зөвлөмж: Өрөөний температурт (15-25 ° C) ажиллах, хэзээ ч мөсөн банн, бага температурт центрифуг хийхгүй.
2. Дээжийг буруу хадгалах эсвэл дээжийг хэт удаан хадгалах.
Зөвлөмж: Дээжийг -80 хэмд хадгалах эсвэл шингэн азотод хөлдөөх, хөлдөөх гэсгээх аргыг олон удаа хэрэглэхээс зайлсхийх;шинэхэн цуглуулсан дээжийг РНХ олборлоход ашиглахыг хичээ.
3.Дээжний задрал хангалтгүй
Зөвлөмж: Дээж ба ажлын уусмалыг (шугаман акриламид) сайтар хольж, тасалгааны температурт (15-25 ° C) 10 минутын турш өсгөвөрлөсөн эсэхийг шалгана уу.
4.Улгагчийг буруу нэмсэн
Зөвлөмж: RNase-Free ddH2O-г цэвэршүүлэх баганын мембраны дунд хэсэгт нэмсэн эсэхийг шалгаарай.
5. Buffer viRW2 дахь усгүй этилийн спиртийн буруу эзэлхүүн
Зөвлөмж: Зааврыг дагаж, иж бүрдлийг хэрэглэхийн өмнө viRW2 буферт усгүй этилийн спиртийн хэмжээг зөв нэмээд сайтар холино уу.
6.Зохисгүй дээжийн хэрэглээ.
Зөвлөмж: 500μl буфер viRL тутамд 200μл дээж.Хэт их дээжийн хэмжээ нь РНХ олборлох хурдыг бууруулахад хүргэдэг.
7.Буруу шүүрэлтийн хэмжээ эсвэл бүрэн бус шүүрэл.
Зөвлөмж: Цэвэршүүлэх баганын элюентийн хэмжээ 30-50μl;Хэрэв шүүрэлтийн үр дүн хангалтгүй байвал урьдчилан халаасан RNase-Free ddH нэмэхийг зөвлөж байна.2O ба тасалгааны температурт байрлуулах хугацааг уртасгах, тухайлбал 5-10мин
8.Цэвэршүүлэх баганад buffer viRW2-д зайлж угаасны дараа этанолын үлдэгдэл байна.
Зөвлөмж: Хэрэв viRW2 буферт зайлж, 2 минутын турш хоосон хуруу шилэнд центрифуг хийсний дараа этилийн спирт хэвээр байвал үлдсэн этилийн спиртийг бүрэн арилгахын тулд цэвэршүүлэх баганыг хоосон хоолойд центрифуг хийсний дараа тасалгааны температурт 5 минутын турш үлдээж болно.
Цэвэршүүлсэн РНХ молекулын задрал
Цэвэршүүлсэн РНХ-ийн чанар нь дээж хадгалах, RNase-ийн бохирдол, үйл ажиллагаа зэрэг хүчин зүйлээс хамаарна.
Нийтлэг шалтгаануудын шинжилгээ:
1.Цуглуулсан дээжийг хугацаанд нь хадгалаагүй.
Зөвлөмж: Хэрэв дээжийг цуглуулсны дараа цаг тухайд нь ашиглаагүй бол -80 ℃ эсвэл шингэн азотын температурт нэн даруй хадгална уу.РНХ молекулыг гаргаж авахын тулд боломжтой бол шинээр цуглуулсан дээжийг ашиглахыг хичээ.
2.Цуглуулсан дээжийг удаа дараа хөлдөөж, гэсгээж байна.
Зөвлөмж: Дээж цуглуулах, хадгалах явцад олон удаа хөлдөөх, гэсгээхээс (нэгээс илүүгүй) зайлсхий, эс тэгвээс нуклейн хүчлийн гарц буурна.
3.Хагалгааны өрөөнд RNase-ийг нэвтрүүлсэн эсвэл нэг удаагийн бээлий, маск гэх мэт зүйл хэрэглээгүй.
Зөвлөмж: РНХ-ийн молекулыг задлах туршилтыг РНХ-ийн тусдаа хагалгааны өрөөнд хийх нь хамгийн сайн арга бөгөөд туршилтын өмнө туршилтын хүснэгтийг цэвэрлэнэ.Туршилтын явцад RNase-ийн нөлөөгөөр РНХ-ийн задралаас зайлсхийхийн тулд нэг удаагийн бээлий, маск өмс.
4. Ашиглалтын явцад урвалж RNase-ээр бохирдсон байна.
Зөвлөмж: Холбогдох туршилтуудад зориулж шинэ вирусын РНХ тусгаарлах иж бүрдэлээр солино уу.
5. Центрифугийн хоолой, пипеткийн үзүүр гэх мэт RNase-ийн бохирдол. Зөвлөмж: Центрифугийн хоолой, пипеткийн үзүүр, пипеткүүд бүгд RNase-гүй эсэхийг шалгаарай.
Цэвэршүүлсэн РНХ молекулууд нь доод урсгалын туршилтуудад нөлөөлсөн
Цэвэршүүлэх баганаар цэвэршүүлсэн РНХ молекулууд нь хэт их давсны ион эсвэл уураг байгаа тохиолдолд урвуу транскрипц, Northern Blot гэх мэт туршилтуудад нөлөөлнө.
1.Шилсэн РНХ молекулуудад давсны ионууд үлддэг.
Зөвлөмж: ViRW2 буферт усгүй этилийн спиртийн хэмжээг зөв нэмсэн эсэхийг шалгаад, ашиглалтын зааварт заасан центрифугийн зөв хурдны дагуу цэвэршүүлэх баганыг хоёр удаа угаана. Хэрэв давсны ионууд үлдсэн хэвээр байвал цэвэршүүлэх баганад Buffer viRW2 нэмж, тасалгааны температурт 5 минут байлгана.Дараа нь давсны ионы бохирдлыг хамгийн их хэмжээгээр арилгахын тулд центрифуг хийнэ
2.Шилсэн РНХ молекулуудад этилийн спирт үлдэнэ
Зөвлөмж: Цэвэршүүлэх баганыг viRW2 буферээр угаасан болохыг баталгаажуулсны дараа ашиглалтын зааварт заасан төвөөс зугтах хурдны дагуу хоосон хоолойн центрифуг хийнэ.Хэрэв этанол үлдсэн бол хоосон хоолойд центрифуг хийсний дараа тасалгааны температурт 5 минут байлгаж, үлдсэн этилийн спиртийг хамгийн их хэмжээгээр зайлуулж болно.
Зааварчилгааны гарын авлага:
Вирусын РНХ тусгаарлах иж бүрдэл зааварчилгаа
