Асуудлыг шинжлэхэд зориулсан гарын авлага

The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。

РНХ гаргаж авах боломжгүй эсвэл нуклейн хүчлийн гарц бага байна

Дээжийн РНХ-ийн агууламж, үйл ажиллагааны арга, шингэний хэмжээ гэх мэт нөхөн сэргээх үр ашигт нөлөөлдөг олон хүчин зүйл байдаг.

Нийтлэг шалтгаануудын шинжилгээ:

1. Ашиглалтын явцад мөсөн банн эсвэл бага температурт (4 ° C) центрифуг хийх.

Зөвлөмж: Өрөөний температурт (15-25 ° C) ажиллах, хэзээ ч мөсөн банн, бага температурт центрифуг хийхгүй.

2. Дээжийг буруу хадгалах эсвэл дээжийг хэт удаан хадгалах.

Зөвлөмж: Дээжийг -80 хэмд хадгалах эсвэл шингэн азотод хөлдөөх, хөлдөөх гэсгээх аргыг олон удаа хэрэглэхээс зайлсхийх;шинэхэн цуглуулсан дээжийг РНХ олборлоход ашиглахыг хичээ.

3.Дээжний задрал хангалтгүй

Зөвлөмж: Дээж ба ажлын уусмалыг (шугаман акриламид) сайтар хольж, тасалгааны температурт (15-25 ° C) 10 минутын турш өсгөвөрлөсөн эсэхийг шалгана уу.

4.Улгагчийг буруу нэмсэн

Зөвлөмж: RNase-Free ddH2O-г цэвэршүүлэх баганын мембраны дунд хэсэгт нэмсэн эсэхийг шалгаарай.

5. Buffer viRW2 дахь усгүй этилийн спиртийн буруу эзэлхүүн

Зөвлөмж: Зааврыг дагаж, иж бүрдлийг хэрэглэхийн өмнө viRW2 буферт усгүй этилийн спиртийн хэмжээг зөв нэмээд сайтар холино уу.

6.Зохисгүй дээжийн хэрэглээ.

Зөвлөмж: 500μl буфер viRL тутамд 200μл дээж.Хэт их дээжийн хэмжээ нь РНХ олборлох хурдыг бууруулахад хүргэдэг.

7.Буруу шүүрэлтийн хэмжээ эсвэл бүрэн бус шүүрэл.

Зөвлөмж: Цэвэршүүлэх баганын элюентийн хэмжээ 30-50μl;Хэрэв шүүрэлтийн үр дүн хангалтгүй байвал урьдчилан халаасан RNase-Free ddH нэмэхийг зөвлөж байна.₂O ба тасалгааны температурт байрлуулах хугацааг уртасгах, тухайлбал 5-10мин

8.Цэвэршүүлэх баганад buffer viRW2-д зайлж угаасны дараа этанолын үлдэгдэл байна.

Зөвлөмж: Хэрэв viRW2 буферт зайлж, 2 минутын турш хоосон хуруу шилэнд центрифуг хийсний дараа этилийн спирт хэвээр байвал үлдсэн этилийн спиртийг бүрэн арилгахын тулд цэвэршүүлэх баганыг хоосон хоолойд центрифуг хийсний дараа тасалгааны температурт 5 минутын турш үлдээж болно.

Цэвэршүүлсэн РНХ молекулын задрал

Цэвэршүүлсэн РНХ-ийн чанар нь дээж хадгалах, RNase-ийн бохирдол, үйл ажиллагаа зэрэг хүчин зүйлээс хамаарна.

Нийтлэг шалтгаануудын шинжилгээ:

1.Цуглуулсан дээжийг хугацаанд нь хадгалаагүй.

Зөвлөмж: Хэрэв дээжийг цуглуулсны дараа цаг тухайд нь ашиглаагүй бол -80 ℃ эсвэл шингэн азотын температурт нэн даруй хадгална уу.РНХ молекулыг гаргаж авахын тулд боломжтой бол шинээр цуглуулсан дээжийг ашиглахыг хичээ.

2.Цуглуулсан дээжийг удаа дараа хөлдөөж, гэсгээж байна.

Зөвлөмж: Дээж цуглуулах, хадгалах явцад олон удаа хөлдөөх, гэсгээхээс (нэгээс илүүгүй) зайлсхий, эс тэгвээс нуклейн хүчлийн гарц буурна.

3.Хагалгааны өрөөнд RNase-ийг нэвтрүүлсэн эсвэл нэг удаагийн бээлий, маск гэх мэт зүйл хэрэглээгүй.

Зөвлөмж: РНХ-ийн молекулыг задлах туршилтыг РНХ-ийн тусдаа хагалгааны өрөөнд хийх нь хамгийн сайн арга бөгөөд туршилтын өмнө туршилтын хүснэгтийг цэвэрлэнэ.Туршилтын явцад RNase-ийн нөлөөгөөр РНХ-ийн задралаас зайлсхийхийн тулд нэг удаагийн бээлий, маск өмс.

4. Ашиглалтын явцад урвалж RNase-ээр бохирдсон байна.

Зөвлөмж: Холбогдох туршилтуудад зориулж шинэ вирусын РНХ тусгаарлах иж бүрдэлээр солино уу.

5. Центрифугийн хоолой, пипеткийн үзүүр гэх мэт RNase-ийн бохирдол. Зөвлөмж: Центрифугийн хоолой, пипеткийн үзүүр, пипеткүүд бүгд RNase-гүй эсэхийг шалгаарай.

Цэвэршүүлсэн РНХ молекулууд нь доод урсгалын туршилтуудад нөлөөлсөн

Цэвэршүүлэх баганаар цэвэршүүлсэн РНХ молекулууд нь хэт их давсны ион эсвэл уураг байгаа тохиолдолд урвуу транскрипц, Northern Blot гэх мэт туршилтуудад нөлөөлнө.

1.Шилсэн РНХ молекулуудад давсны ионууд үлддэг.

Зөвлөмж: ViRW2 буферт усгүй этилийн спиртийн хэмжээг зөв нэмсэн эсэхийг шалгаад, ашиглалтын зааварт заасан центрифугийн зөв хурдны дагуу цэвэршүүлэх баганыг хоёр удаа угаана. Хэрэв давсны ионууд үлдсэн хэвээр байвал цэвэршүүлэх баганад Buffer viRW2 нэмж, тасалгааны температурт 5 минут байлгана.Дараа нь давсны ионы бохирдлыг хамгийн их хэмжээгээр арилгахын тулд центрифуг хийнэ

2.Шилсэн РНХ молекулуудад этилийн спирт үлдэнэ

Зөвлөмж: Цэвэршүүлэх баганыг viRW2 буферээр угаасан болохыг баталгаажуулсны дараа ашиглалтын зааварт заасан төвөөс зугтах хурдны дагуу хоосон хоолойн центрифуг хийнэ.Хэрэв этанол үлдсэн бол хоосон хоолойд центрифуг хийсний дараа тасалгааны температурт 5 минут байлгаж, үлдсэн этилийн спиртийг хамгийн их хэмжээгээр зайлуулж болно.

Зааварчилгааны гарын авлага:

Вирусын РНХ тусгаарлах иж бүрдэл зааварчилгаа