Асуудлын шинжилгээний гарын авлага

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

Бага ургац эсвэл ДНХ байхгүй

Геномын ДНХ-ийн гарцад ихэвчлэн сорьцын эх үүсвэр, дээжийн нас, дээжийг хадгалах нөхцөл, үйл ажиллагаа зэрэг олон хүчин зүйл нөлөөлдөг.

Олборлох явцад геномын ДНХ-г олж авах боломжгүй байсан

1. Эдийн дээжийг буруу хадгалсан эсвэл хэт удаан хадгалснаас болж геномын ДНХ задрахад хүргэдэг.

Зөвлөмж: Эдийн дээжийг шингэн азот буюу -20-д хадгална°C;шинээр цуглуулсан дээжийг геномын ДНХ-ийн задлахад ашиглахыг хичээ.

2. Дээжний хэмжээ хэт бага байх нь харгалзах геномын ДНХ-г гаргаж авахгүй байх шалтгаан болдог.

Зөвлөмж: Удаан хугацаанд хадгалагдсан эсвэл геномын ДНХ-ийн ноцтой доройтолд орсон эд эсийн дээжийн хувьд геномын ДНХ-г их хэмжээгээр гаргаж авахын тулд эд эсийн дээжийн хэмжээг зохих ёсоор нэмэгдүүлж болно.Дээжний хэмжээг ДНХ-ийн хэрэгцээнд нийцүүлэн тодорхойлж болох боловч шинэ дээж 100 мг, хуурай дээж 30 мг-аас хэтрэхгүй байх ёстой.

3. Дээжийг шингэн азотоор нунтаглах эсвэл шингэн азотын дараа хэт удаан байрлуулахгүй.

Зөвлөмж: ДНХ-г задлах явцад эсийн ханыг эвдэхийн тулд дээжийг шингэн азотоор бүрэн нунтаглах шаардлагатай;нунтагласны дараа дээжийн нунтагыг 65 хэмд урьдчилан халаасан PL1 рүү шилжүүлнэ үү°C аль болох хурдан (нунтаг хайлмагц геномын ДНХ хурдан задарч эхэлнэ) .

4. Foregene Protease-ийн зохисгүй хадгалалт нь үйл ажиллагааг бууруулж эсвэл идэвхгүй болгодог.

Зөвлөмж: Foregene Protease-ийн хадгалах нөхцлийг баталгаажуулах эсвэл ферментийн гидролизийн шинэ Foregene Protease-ээр солих.

5. Энэхүү иж бүрдэл нь буруу хадгалагдсан эсвэл хэт удаан хадгалагдсаны улмаас иж бүрдэл дэх зарим эд анги эвдрэлд хүргэдэг.

Зөвлөмж: Холбогдох үйл ажиллагаанд зориулж шинэ ургамлын геномын ДНХ олборлох иж бүрдэл худалдаж аваарай.

6. Багцыг зохисгүй ашиглах.

Зөвлөмж: Ургамлын геномын ДНХ-г гаргаж авах, цэвэршүүлэх дээжүүдэд зориулсан Ургамлын ДНХ тусгаарлах иж бүрдэл худалдаж аваарай.

7. a нэмэхгүйгээр буфер ДБусгүй этанол.

Зөвлөмж: Буфер ДБ-д абсолют этанолын зөв хэмжээг нэмэх хэрэгтэй.

8. Цахиурын мембран дээр уусгагчийг зөв дусаагүй.

Зөвлөмж: Урьдчилан халаасан уусмалыг 65 хэмд нэмнэ℃Цахиурт гель мембраны дунд хүртэл дуслаар дусааж, шүүрлийн үр ашгийг нэмэгдүүлэхийн тулд тасалгааны температурт 5 минут байлгана.

Бага өгөөжтэй геномын ДНХ авахын тулд олборлолт

1. Дээжийг буруу хадгалсан эсвэл хэт удаан хадгалснаас болж геномын ДНХ задрахад хүргэдэг.

Зөвлөмж: Эдийн дээжийг -20 хэмд хадгална℃;шинээр цуглуулсан эд эсийн дээжийг геномын ДНХ-ийн олборлолтод ашиглахыг хичээ.

2. Хэрэв эд эсийн дээжийн хэмжээ хэтэрхий бага байвал гаргаж авсан геномын ДНХ бага байх болно.

Зөвлөмж: Зарим ургамлын дээж нь усаар баялаг, тухайлбал, замаг гэх мэт усны ургамал байдаг тул тунг зохих ёсоор нэмэгдүүлэх эсвэл хагалгааны өмнө усыг бага зэрэг усгүйжүүлж болно.

3. Дээжийг шингэн азотоор сайтар нунтаглаагүй эсвэл нунтагласны дараа тасалгааны температурт хэт удаан байлгасан.

Зөвлөмж: Шингэн азотын нунтаглалт хангалттай байх ёстой бөгөөд дээжийн эсийн ханыг аль болох эвдэх;нунтаглалтын дараа нэн даруй дээжийн нунтагыг 65 руу шилжүүлнэ℃дараагийн алхамд зориулж урьдчилан халаасан буфер PL1.

4. Зөв иж бүрдлийг ашиглахгүй байх.

Зөвлөмж: Ургамлын геномын ДНХ-г гаргаж авах, цэвэршүүлэхийн тулд зориулалтын Ургамлын ДНХ тусгаарлах иж бүрдэл ашиглана уу.

5. Foregene Protease-ийн зохисгүй хадгалалт нь үйл ажиллагааг бууруулж эсвэл идэвхгүй болгодог.

Зөвлөмж: Foregene Protease-ийн хадгалах нөхцлийг баталгаажуулах эсвэл ферментийн гидролизийн шинэ Foregene Protease-ээр солих.

6. Угаах шингэний асуудал

Зөвлөмж: Буфер EB-г уусгахдаа ашиглана уу;ddH ашиглаж байгаа бол₂O эсвэл бусад ялгаруулагч бодисуудын рН нь 7.0-8.5 хооронд байгаа эсэхийг шалгаарай.

7. Угаагч бодис дусаагүй байна

Зөвлөмж: Цахиурт мембраны дунд хэсэгт уусмалын дуслыг нэмж, шүүрлийн үр ашгийг нэмэгдүүлэхийн тулд өрөөний температурт 5 минут байлгана уу.

8. Элюентийн хэмжээ хэтэрхий бага байна

Зөвлөмж: ДНХ-ийн геномын шүүрлийг зааврын дагуу дор хаяж 100-аас багагүй хэмжээгээр хэрэглэнэ.мкл.

Бага цэвэршилттэй геномын ДНХ-г гаргаж авсан

Геномын ДНХ-ийн цэвэршилт бага байгаа нь энзимийг таслах боломжгүй, зорилтот генийн фрагментийг ПГУ-аар олж авах боломжгүй гэх мэт доод урсгалын туршилтууд бүтэлгүйтэх эсвэл муу үр дагаварт хүргэдэг.

1. Төрөл бүрийн уургийн бохирдол, РНХ-ийн бохирдол.

Шинжилгээ: Баганыг угаахын тулд буфер PW ашиглаагүй;Баганыг зөв центрифугийн хурдаар угаахын тулд буфер PW ашиглаагүй.

Зөвлөмж: дээд давхаргыг баганаар дамжих үед тунадасны дотор хур тунадас байхгүй эсэхийг шалгахыг хичээ;цэвэршүүлэх баганыг зааврын дагуу Buffer PW-ээр угаахаа мартуузай, энэ алхамыг орхигдуулж болохгүй.

2. Бохирдлын ионы бохирдол.

Шинжилгээ: Buffer WB угаах баганыг орхисон эсвэл зөвхөн нэг удаа угаасан тул ионы бохирдол үүссэн.

Зөвлөмж: Үлдэгдэл ионуудыг аль болох арилгахын тулд зааврын дагуу Buffer WB-ээр хоёр удаа угаахаа мартуузай.

3. RNase бохирдол.

Шинжилгээ: Экзоген RNase буферт нэмэгдсэн;Buffer PW-д буруу угаах ажиллагаа нь RNase-ийн үлдэгдэл үүсгэж, in vitro транскрипц гэх мэт доод урсгалын РНХ-ийн туршилтын үйл ажиллагаанд нөлөөлнө.

Зөвлөмж: Foregene цувралын нуклейн хүчил олборлох иж бүрдэл нь нэмэлт RNase-гүйгээр РНХ-г арилгах боломжтой бөгөөд Ургамлын ДНХ тусгаарлах иж бүрдэл дэх бүх урвалжуудад RNase шаардлагагүй;цэвэршүүлэх баганыг зааврын дагуу Buffer PW-ээр угаахаа мартуузай, энэ алхамыг орхигдуулж болохгүй.

4. Этанолын үлдэгдэл.

Шинжилгээ: Цэвэршүүлэх баганыг Buffer WB-ээр угаасны дараа хоосон хоолойн центрифуг хийгдээгүй.

Зөвлөмж: Хоосон хоолойг зөв центрифуг хийх зааврыг дагана уу.

Заавар гарын авлага:

Ургамлын ДНХ тусгаарлах иж бүрдэл зааварчилгаа