Шууд RT-qPCR хэрэгсэл II
Багцын тодорхойлолт:
◮Foregene-ийн бүтээсэн Foreasy урвуу транскриптаза ба Foreasy HS Taq ДНХ полимеразыг ашиглан өвөрмөц урвалын буфер бүхий шууд RT-qPCR хэрэгсэл нь энэхүү иж бүрдлийг хүчтэй эсэргүүцэлтэй, нийцтэй болгодог бөгөөд Foregene Lysis системийг загвар болгон ашиглах урвалыг шууд турших боломжтой.Энэхүү иж бүрдэл нь COVID-19 нуклейн хүчил илрүүлэх иж бүрдэл болон бусад эмгэг төрүүлэгч бактерийн нуклейн хүчлийг илрүүлэх хэрэгсэл боловсруулахад хэрэглэгдэж болно.
Тодорхойлолт
Шууд RT-qPCR иж бүрдэл нь тусад нь савласан RT-qPCR буфер, өндөр үр ашигтай Foreasy HS Taq ДНХ полимеразагаар хангадаг.болон Урвуу транскриптаза (MMLV),энгийн баталгаажуулалтын хүрээнд арын иж бүрдэл болон системийн тохиргоог бий болгоход тохиромжтой.
Foregene-ийн бүтээсэн Foreasy урвуу транскриптаза ба Foreasy HS Taq ДНХ полимеразыг ашиглан өвөрмөц урвалын буфер бүхий шууд RT-qPCR хэрэгсэл нь энэхүү иж бүрдлийг хүчтэй эсэргүүцэлтэй, нийцтэй болгодог бөгөөд Foregene Lysis системийг загвар болгон ашиглах урвалыг шууд турших боломжтой.Энэхүү иж бүрдэл нь COVID-19 нуклейн хүчил илрүүлэх иж бүрдэл болон бусад эмгэг төрүүлэгч бактерийн нуклейн хүчлийг илрүүлэх хэрэгсэл боловсруулахад хэрэглэгдэж болно.
Энэхүү иж бүрдэл нь IVD бүтээгдэхүүний шууд бүрэлдэхүүн хэсэг болж, хялбар бөгөөд хурдан ашиглах боломжтой.Үүнийг дахин боловсруулахгүйгээр хялбархан шалгах шаардлагатай.
Үзүүлэлтүүд
500Т, 50000Т
Иж бүрдэл хэсгүүд
| Багцын агуулга (20 мкл урвалын систем) | IM-05111-02 | IM-05112-02 |
| 500 Т | 50,000 Т | |
| Урьдчилан таамагласан Рурвуу транскриптаза (200 U/μL) | 50 мкл×1 | 1 мл×5 |
| Foreasy HS Taq ДНХ Полимераз (5 U/μL) | 100 мкл×1 | 1 мл×10 |
| 2 × Шууд RT-qPCRБуфер | 1 мл × 5 | 500 мл × 1 |
| Заавар | 1 | 1 |
Үйлдлийн алхамууд
Х: Загвар болон урвалжийг бэлтгэ
1. Бэлтгэсэн РНХ загвар (РНХ-ийн загварыг гаргаж авах, цэвэршүүлэхийн тулд Foregene Total RNA Isolation Kit цуврал иж бүрдлийг ашиглахыг зөвлөж байна) эсвэл дээжийг хагалах бүтээгдэхүүн (Foregene Lysis системийг ашиглахыг зөвлөж байна), тусгай праймер (10 μM) болон бусад холбогдох материал, багаж хэрэгслийг бэлтгэ.
2. 2 × Шууд RT-qPCR буфер, RNase-гүй ddH2O болон 20 × ROX лавлагаа будгийг (хэрэв шаардлагатай бол) мөстэй хайрцагт хийж, тэдгээрийг байгалийн аргаар хайлуулж, зөөлөн холино.
Б: RT-qPCR системийг бэлтгэх
Урвалын системийн урвалын буферийн эзэлхүүний хагасыг авах (жишээлбэл, системийн хэмжээ 20 мкл бол 10 мкл 2 × Шууд RT-qPCR буфер авах шаардлагатай.). Учир ньтохирох хэмжээний фермент, бид үүнийг санал болгож байнаM-MLV: 10-30 U/20 мкл урвалын систем,ТакДНХ полимераз:1-2 U/20 мкл урвалын системЭнэ бол бидний санал, та үүнийг туршиж, тохируулах хэрэгтэй), РНХ загвар, тусгай праймер болон датчик нэмж, RNase-Free ddH нэмнэ.2O - 20 мкл.RT-qPCR урвалын системийн тусгай бэлтгэлийг дараах хүснэгт 1-ээс харж болно.
Хүснэгт 1: RT-qPCR системийг бэлтгэ
| Бүрэлдэхүүн хэсэг | Эзлэхүүн | Эцсийн төвлөрөл |
| 2× Шууд RT-qPCR буфер | 10 мкл | 1× |
| Урвуу транскриптаза (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq ДНХ Полимераз | 1-2 U | |
| Урагшаа праймер (10 мкм) | 0.8 мкл | 50-900нМ |
| Урвуу праймер (10 мкм) | 0.8 мкл | 50-900нМ |
| Сорьц (4 мкм) | 1 мкл | 200нМ |
| Загвар (РНХ эсвэл Лизат) | X мкл | |
| 20× ROX лавлагаа будаг | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6.4-X) мкл | |
| Нийт эзлэхүүн | 20 мкл |
Тайлбар: Forward Primer болон Reverse Primer нь зорилтот генийн тусгай праймерууд юм.qPCR системийг практик туршилтын болон ПГУ-ын загваруудын дагуу тохируулж болно.Ихэнх праймеруудын эцсийн концентрацид 400 нМ-ийг санал болгож байна.Бэлтгэсэн концентраци болон санал болгож буй эцсийн концентрацийн дагуу тусгай праймер болон датчикийн хэмжээг тохируулна уу.
1*: Төрөл бүрийн тоон ПГУ-ын хэрэгслийн дагуу ROX лавлагаа будгийн тохиромжтой эцсийн концентрацийг сонгоно.Нийтлэг тоон ПГУ-ын хэрэгслийн ROX лавлагаа будгийн оновчтой концентрацийг дараах хүснэгтэд үзүүлэв.
| Тоон ПГУ-ын багажууд | ROX Reference Dye-ийн эцсийн концентраци |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/1-р алхам,гэх мэт. | 1× (жишээ нь, 20 мкл урвалын системд 1μl 20×ROX лавлагаа будаг нэмнэ) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P болон Mx4000 гэх мэт. | 0.5× (жишээ нь, 20 мкл урвалын системд 0.5μl 20×ROX лавлагаа будаг нэмнэ) |
| Roche PCR багаж, Bio-Rad PCR багаж, Эппендорф тоон ПГУ-ын хэрэгсэл гэх мэт. | ROX лавлагаа будаггүй |
Хадгалалт ба Хадгалах хугацаа
Багцыг -20 ± 5 ℃ хэмд хадгална.Үүнийг нэн даруй -20℃ термостатик хөргөгчинд хадгална.Тохиромжтой нөхцөлд хадгалсан тохиолдолд хүчинтэй байх хугацаа 2 жил байна.
