ForeDirect RT-qPCR хэрэгсэл
Багцын тодорхойлолт:
◮РНХ цэвэршүүлэх процессгүйгээр арчдас цуглуулгаас шууд бодит цагийн РНХ-г олшруулахад зориулагдсан.Энэхүү иж бүрдэл нь qRT-PCR циклийг нэг цагийн дотор дуусгадаг.Ферментийн холимог нь урвуу транскриптаза, халуун эхлэл Так ДНХ полимераза, RNase дарангуйлагчийн оновчтой холимог юм.Урвалын буфер нь оновчтой буферийн бүрэлдэхүүн хэсгүүд, Mg зэрэг шаардлагатай бүх бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг агуулдаг2+, dUTP болон dNTP.
Тодорхойлолт
ForeDirect RT-qPCR иж бүрдэл нь РНХ цэвэршүүлэх процессгүйгээр арчдас цуглуулгаас РНХ-ийг шууд бодит цагийн олшруулахад зориулагдсан.Энэхүү иж бүрдэл нь qRT-PCR циклийг нэг цагийн дотор дуусгадаг.Ферментийн холимог нь урвуу транскриптаза, халуун эхлэл Так ДНХ полимераза, RNase дарангуйлагчийн оновчтой холимог юм.Урвалын буфер нь оновчтой буферийн бүрэлдэхүүн хэсгүүд, Mg зэрэг шаардлагатай бүх бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг агуулдаг2+, dUTP болон dNTP.
Үзүүлэлтүүд
100Т
Иж бүрдэл хэсгүүд
| Нуклейн хүчил ялгаруулах бодис |
| РНХ хамгаалагч |
| 2 × RT-qPCR буфер |
| Ферментийн холимог (Taq&M-MLV) |
| Зааварчилгаа |
ПГУ-ын хэрэглээ
1. ПГУ-ын урвалын хоолойнуудыг богино хугацаанд центрифуг хийсний дараа олшруулах хэрэгслийн дээжийн саванд хийнэ.
2. Дулааны протокол
| Алхам | Температур | Цаг хугацаа | Цикл | |
| 1 | Урвуу хуулбар | 50℃ | 15 минут | 1 |
| 2 | Урьдчилан денатураци | 95℃ | 1 мин | 1 |
| 3 | Денатураци | 95℃ | 10 секунд | 42 |
| 4 | Анги/өргөтгөл | 60℃ | 30 секунд | |
Жич:Флюресцент дохиог мөчлөг бүрийн өргөтгөлийн алхамын дараа шууд илрүүлсэн.
3. Тохируулсны дараа файлаа хадгалаад урвалын програмыг ажиллуул.
Үйлдлийн алхамууд
Урвалж бэлтгэхийн өмнө иж бүрдэл дэх бүх урвалжийг тасалгааны температурт гэсгээж, зөөлөн холино.
Урвалж бэлтгэх
1. Нуклейн хүчлийг ялгаруулах хольц бэлтгэнэ
| Бүрэлдэхүүн хэсэг | Дээж эсвэл хяналтын хэмжээ |
| Нуклейн хүчил ялгаруулах бодис | 5 мкл |
| РНХ хамгаалагч | 0.5 мкл |
2. Урвалын хольц бэлтгэнэ
| Бүрэлдэхүүн хэсэг | Дээж эсвэл хяналтын хэмжээ |
| 2 × RT-qPCR буфер | 15 мкл |
| Ферментийн холимог (Taq&M-MLV) | 1.5 мкл |
| Праймер ба зонд | 1 мкл |
Хадгалалт ба Хадгалах хугацаа
-Иж бүрдлийг -20 хэмд хадгална± 5℃.Хүчинтэй байх хугацаа 12 сар байна.
-Дахин давтагдах хөлдөөх гэсэлтийн мөчлөгөөс (<5 цикл) зайлсхий.
